自体骨髓间充质干细胞用于小型猪全脱位牙延迟再植的实验研究

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1、万方数据中图分类号R392UDC幽博士学位论文学校代码密级10533自体骨髓间充质干细胞用于小型猪全脱位牙延迟再植的实验研究AnExperimentalStudyForDelayedReplantationofCompletelyAvulsedTeethByUsingAutologousBoneMarrowMesenchymalStemCellsinMiniaturePig作者姓名：王璇学科专业：临床医学研究方向：儿童牙外伤、牙再生学院(系、所)：湘雅医院导指师：唐瞻贵教授导教师：钟良军教授论文答辩日期垄!墨：

2、!三12r答辩委员会主席中南大学二O一三年九月万方数据学位论文原创性声明IYltl2l／116l／18l／16ttl7l譬tll了tlt本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：学位论文版权使

3、用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：万方数据博士学位论文中文摘要自体骨髓间充质千细胞用于小型猪全脱位牙延迟再植的实验研究中文摘要摘要：牙全脱位(Completelyavulsedteeth，CAT)是造成儿童年轻恒牙早失的主要疾

4、病之一。牙齿离体时间、细胞活力和微环境是影响牙再植治疗成功与否的主要因素。研究证实，当牙齿离体1个小时，且没有保存在特殊的储存液中，根面几乎找不到生活的牙周成纤维细胞，而牙根及牙槽窝中是否存有足够生活的组织细胞对外伤牙牙周组织的愈合起着决定性的作用。然而，牙外伤多为突发事件，上述因素很难在就诊前被控制，目前，临床医师多采取国际牙外伤联合委员会制定的各类牙外伤操作指南进行临床治疗，对于CAT主要依靠患者自身的再生能力来完成整个牙周组织的损伤修复，疗效十分局限，加之干扰因素较多，个体间可比性差，临床治疗难以得到突破

5、性进展。近年来组织工程技术在牙周再生治疗中已显现出了优势，如果能在牙根表面和牙槽窝中回植足够数量的生活细胞，那么牙齿离体时间的长短对治疗效果的影响将会大大降低。研究表明牙周膜干细胞是牙周组织理想再生的首选细胞，然而自体牙周膜干细胞来源有限，尤其是在外伤牙的案例中更难获得。近年来非牙源性干细胞再生牙齿组织已成为一种选择。在诸多非牙源性干细胞中，骨髓间充质干细胞是较为成熟的一类，研究证明在适当的微环境中，骨髓问充质干细胞亦可分化成类成牙骨质细胞，类牙周膜细胞和类骨细胞，完成理想牙周复合体再生的过程，异体移植所带来的

6、潜在风险也将会避免，这将极大推进全脱位牙再植治疗效果，降低并发症带来的II万方数据博士学位论文中文摘要失牙风险。然而将自体骨髓间充质干细胞应用于CAT延迟再植的相关研究尚未见报道，为了进一步评价此方法在临床应用中的可行性，本研究将着力探讨骨髓间充质干细胞再生牙周组织的潜力，并利用小型猪建立全脱位牙动物模型，探讨骨髓间充质干细胞再生牙周复合体的相关机理，为自体非牙源性干细胞再生牙体组织寻找理论依据。本研究包括以下三个部分：第一部分小型猪骨髓间充质干细胞的体外培养和鉴定目的：建立稳定的小型猪骨髓间充质干细胞体外培养

7、体系，并对所获细胞进行初步鉴定，为后期研究提供基础和前提。方法：以四川达硕小型猪为研究对象，全麻下抽取其髂骨骨髓血，采用Ficoll淋巴细胞密度梯度离心法处理血样，待样本分层后，吸取单核细胞层细胞进行细胞培养。倒置显微镜、流式细胞仪，细胞生长曲线，免疫组化染色，酶联免疫检测仪等对所获细胞生长特性，多项诱导分化能力和表面特异标记物进行观察和分析，初步鉴定干细胞的相关生物学特性。结果：镜下观分离所获小型猪骨髓问充质干细胞成长梭形涡旋式生长，生长状态良好。P1细胞克隆形成率为10．28+0．69％，活细胞比率为98．

8、174-1．89％，流式细胞检测细胞表面特异标记物CD44和CDl05呈阳性表达，分别为76．5％和92．6％；CD45和CD34呈阴性表达，分别为5．9％和2．3％。多项诱导分化实验证实小型猪间充质干细胞有成骨成脂分化潜能。结论：本实验采用Ficoll淋巴细胞密度梯度法成功分离获得小型猪骨髓间充质干细胞，分离所获细胞增殖能力旺盛，具有跨胚层横向分化潜能。III万方数据博士学位论文中文