祛风通窍方对血管性痴呆大鼠自噬、凋亡及血液流变学的影响研究

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1、目录1祛风通窍方对血管性痴呆大鼠白噬、凋亡及血液流变学的影响研究⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．1中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11．2英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯51．3前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯111．4材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯一⋯⋯⋯⋯．151．5结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯251．6讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯391．7结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、521．8参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯531．9英汉缩略词对照表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯622致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯633自噬与神经系统疾病(综述)⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯64f煳掣必祛风通窍方对血管性痴呆大鼠自噬、凋亡及血液流变学．的影响研究摘要目的：通过对血管性痴呆(Vasculardementia，VD)模型大鼠微管相关蛋白l轻链3(mi-crotubule-associatedprotein1lightchain3，MAP1一LC3，LC3)、自

3、噬相关蛋白Beclin一1、自噬小体、细胞凋亡指数(ApoptoticIndex，AI)及血液流变学的观察，研究祛风通窍方对VD大鼠自噬、凋亡及血液流变学的影响，初步探讨祛风通窍方对VD大鼠的保护机制。方法：1)动物分组：健康雄性SD大鼠90只，永久性结扎双侧颈总动脉(2．VO)法制备VD模型，以Morris水迷宫实验作为筛选标准，将符合要求的SD大鼠按随机对照表法分为假手术组、模型组、尼莫地平组(西药组)、祛风通窍方高剂量组(高剂量组)、祛风通窍方中剂量组(中剂量组)、祛风通窍方低剂量组(低剂量组)各12只。假

4、手术组只分离双侧颈总动脉(Commoncarotidartery，CCA)不结扎。2)给药：西药组给予尼莫地平6．25mg／kg／d浓度混悬液灌胃，高、中、低剂量组分别予以相当于祛风通窍方生药26．89／kg／d、13．49／kg／d、6．79／kg／d的浓缩液灌胃，假手术组、模型组予以生理盐水灌胃，每天1次，每次3ml，连续喂养30天。3)标本采集：1％戊巴比妥钠(40mg／kg)腹腔麻醉，仰卧固定，开胸，快速心脏取血(5m1)，注入抗凝管内，用于血流变学检测；随机抽取5只大鼠断头处死，取新鲜脑组织PE管中．7

5、0℃保存备用；7只大鼠心脏灌注内固定，断头取脑，固定、脱水、包埋制成切片。4)观察指标：Morris水迷宫试验检测VD大1鼠学习记忆功能；电镜观察神经元细胞超细微结构；WesternBlot法检测自噬相关蛋白LC3表达；免疫组化检测Beclin．1蛋白表达；原位末端标记法(Tu姬L法)检测海马神经元AI；流变快测仪检测血液流变学指标。结果：1)Morris水迷宫实验：与假手术组比较，模型组及各药物干预组逃避潜伏期(escapelatency，EL)均延长，平台象限停留时间缩短，跨越虚拟平台的次数减少，差异有统计学

6、意义(PO．05)。与西药组比较，高剂量组EL缩短，平台象限停留时间延长，跨越虚拟平台次数增加，但差异无统计学意义(P>O．05)。与低剂量组比较，西药组、高、中剂量组EL缩短，平台象限停留时间延长，跨越虚拟平台的次数增加，差异有统计学意义(P<0．05)。2)电镜结

7、果：电镜观察海马神经元细胞：模型组可见大量空泡，细胞核形态不规则，核膜结构不清，甚者核碎裂，细胞器明显减少，线粒体明显水肿，线粒体嵴双层膜结构不清，甚者固缩坏死；西药组、高、中剂量组细胞核形态规则，核呈圆形，细胞器较丰富，线粒体、内质网轻微水肿，线粒体嵴可见，可见少量溶酶体；低剂量组神经元细胞结构有所改善，但仍可见细胞核固缩碎裂，细胞器减少，线粒体、内质网水肿。电镜观察皮层额叶神经元细胞：模型组细胞核形态不规则，甚者碎裂，细胞器明显减少，线粒体固缩，嵴的双层膜结构消失；西药组、高、中剂量组细胞核圆形，核膜清晰，细

8、胞器较丰富，线粒体、内质网略显水肿，溶酶体明显。低剂量组与模型组比2较有所改善，但仍见细胞核固缩，细胞器减少，线粒体、内质网水肿。海马及皮层均未见自噬小体结构。3)LC3蛋白检测：与假手术组比较，模型组及各药物干预组LC3蛋白表达水平均升高，差异有统计学意义(P