甘蔗f2kp基因克隆和表达

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1、摘要甘蔗是热带与亚热带地区的重要糖料作物。为增加蔗糖含量，研究蔗糖代谢过程中调节碳分配相关物质是必要的。果糖．2，6．二磷酸(Fructose一2，6一bisphosphate，Fru．2，6-P2)是植物体内非常重要的碳代谢调节物质，决定光合中间产物向蔗糖或淀粉途径分配。Fru．2，6．P2含量是由果糖一6．磷酸，2．激酶／果糖．2,6．二磷酸酯酶(fructose一6．phosphate，2-kinase／fructose一2，6-bisphosphatase，F2KP)决定的。因此通过调控F2KP改变Fru．2，6-P2含量能够影响蔗糖与淀粉之间的碳分配。本研究涉及甘蔗F2

2、KP的eDNA克隆与表达分析。目前取得的结果如下：(1)从甘蔗叶中克隆分离到甘蔗F2KP基因的eDNA片段(EU696757)。该片段含2085bp的完整开放阅读框，编码694氨基酸，命名为SoF2KP-L。SoF2KP．L蛋白C端含有F2KP保守的激酶结构域和酯酶结构域。(2)从甘蔗茎中获得了三段F2KP基因转录产物，分别命名为SoF2KP-S1、SoF2KP-S2、SoF2KP-S3。这三个片段包含的开放阅读框长度均小于So-F2KPL。SoF2KP．S1蛋白只有残缺的激酶结构域；SoF2K．P．S2蛋白含有完整的激酶结构域但酯酶结构域缺失；SoF2KP-S3只能翻译几个氨基

3、酸即终止翻译。(3)选取SoF2KP-S2、SoF2KP-L这两个F2KP基因转录产物，分别构建植物表达载体，通过农杆菌介导的方法转化模式植物烟草和拟南芥。目前已获得相应的抗性植株。关键词：甘蔗；F2KP：克隆；表达AbstractAbstractSugarcaneisacommerciallyimportantsugarcropgrownintropicalandsub·tropicalregions．Toachievetheultimateaimofincreasingthesucrosecontentinsugarcanestem，itisnecessarytoresear

4、chtheprincipalregulatorymetabolitesintheentiresucroseaccumulationprocess．Fructose一2，6-bisphosphateffru一2，6-P2)isaregulatorymetabolitewhichcontributestothecoordinationofsucrosesynthesiswithrateofC02fixationandtheregulationofphotosyntheticallyassimilatedcarbonpartitioningbetweensucroseandstarch

5、inplant．ThelevelofFro-2，6-P2dependsontheactivityoffructose一6-phosphate，2一kinase／fructose-2，6-bisphosphatase(F2KP)．TheresearchmainlyfocusedonF2KPofsugarcane．Theprimaryresultsoftheresearchareasfoflows：I．Afull-lengtheDNAencodingF2KP(EU696757)wasisolatedfromtheleafofsugarcanebythemethodofreverset

6、ranscription—polymerasechainreactionfRT-PCR)．ThecDNAnamedSoF2KP-Lcontainsa2085bpopenreadingframe(oPt)，encoding694aminoacids．2．TheotherthreecDNAfragmentswereisolatedfromthestemofsugarcane．ThesefragmentswerenamedSoF2KP-S1、SoF2KP-S2、SoF2KP-S3respectively．‘CompairedtoSoF2KP-L，ORFsofthesethreetran

7、scriptionalproductswereallshorterthanthat0置s0F2KP．L3．SoF2KP-LandSoF2KP-S2werechosentobeconstructedintoplantexpressionvetorsandtransformedintomodelplantstabaccoandArabidopsisthalianabyAgrobacterium-mediatedmethod．Putativetransformantswereabtai