儿童过敏性紫癜相关基因表达谱研究

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1、儿童过敏性紫癜相关基因表达谱研究江西省儿童医院肾内科傅睿李娟2011-09-23研究背景过敏性紫癜(HSP)是儿童时期最常见的以小血管炎症为主要病变的系统性血管炎，以皮肤紫癜、胃肠道症状、关节肿痛、肾脏损害为主要临床表现HSP发病率有逐年增多趋势江西省儿童医院每年收治新发HSP住院人数研究背景皮疹反复出现暴发性、坏死性皮肤紫癜肾脏损伤严重的胃肠道大出血新发病例严重肾脏损伤者逐渐增多紫癜性肾炎占儿童继发性肾脏疾病第一位儿童时期终末期肾脏病的主要原因研究背景HSP患儿肾脏是否受累及受累程度是决定其预后的最主要因素肾脏损伤在过敏性紫癜中的发生率达30％～50％研究背

2、景病因及发病机制仍未完全阐明临床上尚缺乏有效的治疗措施加强对过敏性紫癜发病机制、特别是分子发病机制的研究以试图寻找更科学、更有效的治疗方法来控制其进一步发生与发展成为广大儿肾工作者努力的方向研究背景许多研究者、临床工作者均在努力寻找能够减少HSP疾病发生、导致肾损害的各种因素，以期能指导临床治疗，改善HSP的预后目前的研究多集中在单一细胞因子或者单一基因在过敏性紫癜发病及进展中的作用和关系上血清中IL-6、TNF-α水平能够反映HSP患儿的疾病严重程度LinCY,YangYH,LeeCC,etal.Thrombopoietinandinterleukin-6l

3、evelsinHenoch-Schönleinpurpura[J].JMicrobiolImmunolInfect,2006;39(6):476-82HSP患儿血清VCAM-1水平与HSP患儿的疾病严重程度有关傅睿，胡宝金，等.可溶性血管细胞粘附分子1（sVCAM-1）在紫癜性肾炎发病中的作用探讨[J].中国免疫学杂志，2003；19（2）：129－131.研究现状基因多态性及表达异常与HSP的易感性、肾损伤进展、预后有相关性人类白细胞抗原(HLA)-DQAI、HIA-B35、HLA–DRBI肾素-血管紧张素系统(RAS)基因细胞毒性T细胞相关蛋白4基因家族性

4、地中海基因C4基因、PAX2只是从某一方面反映了其中某些单一因素在过敏性紫癜发病中的作用只是针对一个或几个基因进行研究，无法达到对基因网络化、高通量分析的要求我科开展的课题血管细胞粘附分子-1(VCAM-1)在紫癜性肾炎发病中的作用及其临床意义的研究巨噬细胞移动抑制因子在紫癜性肾炎发病中作用及意义巨噬细胞移动抑制因子-173G/C基因多态性与紫癜性肾炎发病的关系足细胞蛋白Podocalyxin在紫癜性肾炎发病机制中的研究松弛素与儿童过敏性紫癜复发及肾损害关系的研究免疫吸附血液灌流技术在儿童重症过敏性紫癜中的临床应用问题目前研究手段的局限性及单一方面性参与HSP

5、发生、发展过程中的主要基因导致HSP患儿肾损伤的基因目前并不十分清楚，需要更先进的研究方法基因芯片技术提供研究平台将几千个基因特异的探针或其cDNA片断固定在载体上能够高通量、准确、快速同时进行成千上万条基因表达的测定对来源于不同个体、不同组织、不同细胞周期、不同发育阶段、不同分化阶段、不同病变、不同刺激下的细胞内的mRNA或逆转录产物cDNA进行检测大规模对这些基因表达的个体特异性、组织特异性、发育阶段特异性、分化阶段特异性、病变特异性、刺激特异性进行综合分析和判断疾病的诊断、鉴别诊断、治疗药物选择、预后判断基因芯片技术在肾脏疾病诊断和治疗中的应用儿童肾病综

6、合征基因表达谱分析系统性红斑狼疮Alport综合征UUO大鼠肾间质纤维化的分子机制糖尿病肾病大鼠研究内容及目的利用基因芯片技术检测HSP患儿外周血、HSPN患儿肾组织基因表达谱，以正常儿童外周血及正常肾组织基因表达谱为对照，对差异表达基因进行生物信息学分析，筛选出HSP患儿疾病发生及肾损伤相关基因，以探讨HSP发生、发展的分子机制研究对象病例组：HSP患儿6例，根据有无尿改变分为非肾损伤组(NHSPN)3例，肾损伤组(HSPN)3例。对照组：选取年龄、性别与病例组相匹配的3例健康体检儿童外周血；正常肾组织1例来自肾肿瘤切除术后远离肿瘤的正常肾组织。HSP诊断符

7、合《实用儿科学》第7版中HSP的诊断标准。HSPN诊断符合中华医学会儿科分会肾脏病学组制定的诊断标准。对照组NHSPN组HSPN组外周血或肾组织治疗前及病情缓解2周后留取外周血治疗前外周血及肾组织外周血及肾组织总RNA抽提及鉴定cDNAmicroarray芯片制备及杂交信号扫描和分析RT-PCR法芯片结果验证实验结果用SPSS10.0软件进行统计学分析研究方法及技术路线研究结果与讨论总RNA质量检测芯片数据评估芯片结果◇总RNA质量检测总RNA经生物分光光度计检测，OD230/OD260/OD280比值均接近1:2:1琼脂糖凝胶电泳图均可以清晰地看到5S、18

8、S和28S条带，亮度28S:18S接近