圆锥动脉干畸形患儿tgfβ2基因序列分析及表达水平的研究

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1、後璺大擎万方数据硕士学位论文(科学硕士学位)圆锥动脉干畸形患儿TGFl32基因序列分析及表达水平的研究姓学导名：科：师：导师组成员：孟颖颖儿科学黄国英教授马端教授马晓静副教授王慧君副研究员本研究受国家自然科学基金(30930096)和国家重大基础科研计划(2010CB529500)的资助，特此感谢!万方数据目录一、英文缩写词汇英汉对照表．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．1二、中文摘要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．2三、英文摘要．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．

2、．．．．．．．．．．．．．．6四、圆锥动脉干畸形患儿TGFB2基因序列分析及表达水平的研究10引言．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯．．．．．．10第一部分圆锥动脉干畸形患儿TGFB2基因编码区DNA序列分析12第二部分圆锥动脉干畸形患儿心脏流出道组织TGFB2基因氓NA表达水平检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．23第三部分圆锥动脉干畸形患儿心脏流出道组织TOFB2基因蛋白表达水平检测⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．36全文总结．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．⋯⋯．．

3、．．．．．．．．．．44五、参考文献．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．45多≮、综述．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．51七、致谢．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．60八、发表文章和参加学术会议．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．．61万方数据复旦大学硕士研究生论文缩略词万方数据复旦大学硕士研究生论文中文摘要圆锥动脉干畸形患儿TGFIl2基因序列分析及表达水平的研究中文摘要先天性心脏病(简称先

4、心病)是我国儿童最常见的出生缺陷病之一，全球发病率约为9／1000，在我国已成为先天畸形的首位病种。圆锥动脉干畸形是一类由于流出道发育异常导致的先天性心血管畸形，占全部先心病的30％，包括法洛四联症、右室双出口、大动脉转位、永存动脉干、肺动脉闭锁等，可以导致新生儿时期出现低氧血症和难以纠正的酸中毒，自然预后不佳。部分患儿经过外科手术纠治后仍将存在一系列残余问题，从而影响患儿的生活质量，并且给社会和家庭带来较大的经济和精神负担。目前，普遍的观点认为先心病是内在遗传易感因素和外界环境致畸因素共同作用的结果。随着分子生物学的不断发展，包括TGFIB

5、2在内的遗传易感基因成为研究热点。TGFIB2是高度保守TGFIB超家族成员之一，具有多种生物学作用。基因敲除的小鼠会导致心脏出现包括右室双流出道、房室管畸形等多种圆锥动脉干畸形，在维甲酸处理的小鼠胚胎中，内源性TGFl32表达降低，小鼠心脏出现流出道隔发育异常。Kubalak等研究发现，RXRA敲除小鼠中TGFl32表达升高，使得细胞凋亡增加，从而导致胚胎出现流出道发育的异常。推测TGFl32基因很可能是圆锥动脉干畸形的致病易感基因。然而，尽管动物实验结果显示TGFl32基因与心脏的畸形发育有密切的相关性，但是人类圆锥动脉干畸形与TGFIB

6、2基因的相关研究还非常有限。本课题拟研究TGFl32基因在圆锥动脉干畸形患儿中的基因型，探寻可能导致圆锥动脉干畸形发生的突变或者单核苷酸多态性，以及分别从转录和翻译水平探究TGFl32基因在圆锥动脉干畸形患儿流出道组织中的表达水平，并且与正常流出道组织中TGFl32基因表达水平相比较，探讨TGFl32基因与人类圆锥动脉干畸形发生的关系，为进一步深入研究圆锥动脉干畸形的发生机制提供实验依据和立论基础。第一部分圆锥动脉干畸形患儿TGFp2基因编码区DNA序列分析目的：通过对圆锥动脉干畸形患儿TGFl32基因外显子编码区序列的检测，探寻可能存在的导

7、致疾病发生的基因变异，明确TGFl32基因是否为圆锥动脉干畸形发生的遗传易感基因及其变异位点。2万方数据复旦大学硕士研究生论文中文摘要方法：应用PCR技术以及测序方法，选取400例确诊为圆锥动脉干畸形的患儿的外周血，检测TGFl32基因外显子编码区序列，分析编码区序列的改变并探寻这些改变与圆锥动脉干畸形发生的关系。结果：入选的400例圆锥动脉干畸形病人诊断分类包括法洛四联症、左室双流出道、右室双出121、大动脉转位和肺动脉闭锁。对TGFl32基因外显子编码区序列检测，400例圆锥动脉干畸形患儿血样中有一例存在一个杂合变异e．597T>C，此种

8、变异位于第四外显子，但是没有引起所编码氨基酸的改变，仍然为异亮氨酸，我们在UCSC数据库中并未查到此种变异，认为其为新发现的同义突变。小结：在400例圆锥动脉干畸形