心脏瓣膜间质细胞凋亡与钙化的相关性研究

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1、第二军医大学硕士学位论文心脏瓣膜间质细胞凋亡与钙化的相关性研究Studyonthecorrelationbetweenheartvalveinterstitialcellsapoptosisandcalcifications研究生：张伯尧导师：徐志云教授导师组：刘晓红副研究员徐激斌副教授宋智刚副教授专业名称：外科学培养单位：第二军医大学附属长海医院胸心外科上海2013年5月独创性声明IIYIIIIJll2IIIJJl3IIJJJl3IJJJJl9JIJJIl6IIIJl5IIIIPJ3JIJIII本人声明所呈交的学位论文是我个人

2、在导师指导下进行的研究工作。除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。本人承担本声明的法律责任。学位论文作者签名：镰f角移日期：．∥c>年加歹日学位论文版权使用授权声明本人完全了解第二军医大学有关保留、使用学位论文的规定，第二军医大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权第二军医大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制

3、手段保存、汇编学位论文。(保密的学位论文在解密后适用本授权书)学位论文作者签名：缘j，白杉日期：沙f)年f月岁日⋯轹r日期：弘侈年‘月岁．日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8刖雷⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯一“⋯⋯⋯⋯“一⋯一g第一部分瓣膜间质细胞凋亡在CAVD瓣膜中的表达⋯1I一、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1

4、2二、实验结果与结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24三、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯32第二部分瓣膜间质细胞凋亡调控机制的初步探讨⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34一、材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35二、实验结果与结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯53三、讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯61全文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯64论文参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯66文献综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯69在读期间发表论文与科研情况⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯75致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯IQgo8⋯⋯⋯⋯⋯⋯76心脏瓣膜间质细胞凋亡与钙化的相关性研究心脏瓣膜间质细胞凋亡与钙化的相关性研究摘要背景心脏瓣膜钙化性病变是常见的心脏瓣膜病理性改变之一。心脏瓣膜发生严重钙化后对心脏血流动力学、心脏瓣膜功能、患者的生活质量和预后均产生产生巨大影响。目前，多数研究提示在瓣膜间质细胞发生钙化的演变过程中，瓣膜间质细胞出现了不同程度的细胞凋亡，鉴于细胞凋亡是多基因调控的主动过程，其中caspase一3是凋亡的主要调控基因，

6、因此细胞凋亡可能影响并参与了瓣膜间质细胞钙化过程。根据基因预测网站发现凋亡敏感标志物caspase．3与mir-30b在3’UTR端存在结合位点，同时国内学者已经通过基因芯片检测正常心脏组织与其他人体内脏器证实，mir-30b表达含量在心脏组织中最高，提示caspase．3可能受到mir-30b的调控继而影响心脏的生理、病理变化。目的1．通过体内、体外实验明确瓣膜间质细胞凋亡与钙化的相关性并确定caspase-3在瓣膜间质细胞凋亡调控中的作用；2．分析mir-30b与细胞凋亡的相关性，并通过体外过表达和抑制实验明确mir-30b

7、对细胞生存功能的影响。方法1．瓣膜间质细胞凋亡在钙化性心脏瓣膜病瓣膜中的表达通过常规组织学染色、免疫组织化学染色、TUNEL、VonKossa染色、流式细胞术对瓣膜组织上的细胞凋亡情况进行分析。通过体外分离鉴定瓣膜间质细胞，应用流式细胞术、VonKossa染色、Westernblot对细胞学上凋亡情况进行验证。2．瓣膜间质细胞凋亡调控机制的初步探讨一1．第二军医大学硕士学位论文通过PCR检测瓣膜组织中mir-30b的表达含量，与瓣膜组织中凋亡情况作出相关性分析。心脏瓣膜间质细胞转染mir-30bmimics或inhibitors

8、后，在体外，使用AnnexinV-FITC／PI对瓣膜问质细胞双染后通过流式细胞检测术检测细胞凋亡情况，通过caspase．3活性检测进一步确定mir-30b对瓣膜间质细胞凋亡能力的影响，通过CCK．8检测mir-30b对瓣膜间质细胞株增殖能力的影响。Weste