蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化的干预及机制初探

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1、《中国图书资料分类法》单位代码：10660分类号：R730学号：S100100贵阳医学院2013届硕士学位论文蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化的干预及机制初探研究生：关丽导师：蒋红梅教授王豫萍副教授年级：2010级专业：临床检验诊断学2013年5月29日1目录摘要„„„„„„„„„„„„„2前言„„„„„„„„„„„„„4材料与方法„„„„„„„„„„„„6结果„„„„„„„„„„„„„12讨论„„„„„„„„„„„„„23参考文献„„„„„„„„„„„„„31英文摘要„„„„„„„„„„„„„37致谢„„„„„„„„„„„„„39略缩词表„„„„„„„„„„„„„40论

2、文原创性声明„„„„„„„„„„41附：综述„„„„„„„„„„„„422蓝莓对大鼠免疫性肝纤维化的干预及机制初探专业临床检验诊断学研究生关丽导师蒋红梅教授王豫萍副教授摘要目的：观察蓝莓对免疫性肝纤维化大鼠肝组织肝细胞生长因子（hepatocytegrowthfactor，HGF）、基质金属蛋白酶-9（Matrixmetallopeptidase-9，MMP-9）以及基质金属蛋白酶组织抑制剂-2（tissueinhibitorofmetalloproteinases-2,TIMP-2）表达的影响，探讨其抗肝纤维化的可能机制。方法：健康雄性Wistar大鼠60只，随

3、机分为6组，正常对照组、肝纤维化模型组、蓝莓原浆低、中、高剂量干预组、复方鳖甲软肝片干预组。肝纤维化模型组及各干预组大鼠给予无菌猪血清腹腔注射(0.5mL/只，每周两次)，制备大鼠肝纤维化模型，共12周。造模的同时，蓝莓原浆低、中、高剂量干预组及复方鳖甲软肝片干预组分别给予蓝莓原浆（0.25mL/100g、0.5mL/100g、1.0mL/100g）、复方鳖甲软肝片（0.054g/100g）灌胃，每日一次，共12周。计算各组大鼠肝脏指数；测定血清丙氨酸氨基转移酶（alanineaminotransferase，ALT）、天冬氨酸氨基转移酶（aspartateami

4、notransferase，AST）和透明质酸（hyaluronicacidHA）水平；检测肝组织匀浆超氧化物歧化酶（superoxidedismutase，SOD)活性和丙二醛（malondialdehyde，MDA)的含量；并进行肝组织病理学检查（HE染色和Masson染色）；实时荧光定量PCR和免疫组织化学法检测大鼠肝组织HGF、MMP-9、TIMP-2mRNA及蛋白的表达。结果：与正常对照组比较，肝纤维化模型组大鼠肝脏指数明显增加（P<0.05）；血清ALT、AST水平有所升高，但无统计学意义（P>0.05）；肝组织匀浆SOD活性明显下降（P<0.05），

5、MDA含量明显增高（P<0.05）；HE、Masson染色显示有明显肝纤维化（P<0.05），胶原表达明显增多；肝组织HGF、3MMP-9、TIMP-2mRNA和蛋白表达升高（P<0.05）。与肝纤维化模型组比较，各干预组大鼠血清ALT、AST水平有所下降，但差异无统计学意义（P>0.05）；肝脏指数明显减少（P<0.05）；蓝莓原浆中、高剂量干预组及复方鳖甲软肝片干预组大鼠肝组织匀浆SOD活性明显升高（P<0.05），MDA含量明显降低（P<0.05）；肝纤维化程度明显减轻（P<0.05），胶原表达减少；肝组织HGF、MMP-9mRNA和蛋白表达明显升高，TIM

6、P-2mRNA和蛋白表达明显降低（P<0.05）。结论：蓝莓对猪血清诱导的大鼠免疫性肝纤维化有一定的干预作用，其机制可能与蓝莓提高机体抗氧化应激能力以及上调HGF、MMP-9，下调TIMP-2的表达有关。关键词肝纤维化；氧化应激；HGF；MMP-9；TIMP-2；蓝莓4前言肝纤维化（hepaticfibrosis，HF)是继发于各种原因引起的肝脏炎症或损伤后组织修复过程中的代偿反应，是慢性肝损伤发展为肝硬化、原发性肝癌的必[1-3]经之路。肝纤维化若不加以控制，其中25%-40%最终发展为肝硬化甚至肝癌。[4]虽然近年来的研究表明，肝纤维化、肝硬化是可以逆转的，但

7、肝硬化逆转难度较大。因此，如何有效理性的治疗肝纤维化的方案，已经成为国内外研究的热点。HF的发生机制是一个复杂的病理过程，其中肝星状细胞(Hepaticstellatecell，[5]HSC)的激活是肝纤维化发生的中心环节和共同通路，当肝脏受损伤时，多种肝脏细胞包括肝细胞、库普弗细胞、窦周内皮细胞以及来自肝外的血小板、淋巴细胞、中性粒细胞可释放活性氧物质、一系列细胞因子和纤维原性介导物质，通过[6-7]自分泌和旁分泌的形式，引起炎症细胞浸润和炎症反应，激活HSC。肝脏细胞外基质（extracellularmatrix,ECM）在肝脏大量沉积是肝纤维化的基本特征，活

8、化的HSC