雪茄外包皮烟发酵中优势微生物筛选及功能研究

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1、分类号密级.UDC单位代码104355硕士学位论文雪茄外包皮烟发酵中优势微生物筛选及功能研究ScreeningandFunctionalIdentificationofDominantMicroorganismsinCigarWrapperduringFermentation研究生姓名张鸽艳指导教师刘好宝研究员教学科专业作物栽培学与耕作学种研究方向烟叶发酵种中国青岛二0一八年六月ScreeningandFunctionalIdentificationofDominantMicroorganismsinCigarWrapperduringFermentationThesissubmitte

2、dtoQingdaoAgriculturalUniversityInFulfillmentoftheRequirementfortheDegreeofMasterofAgronomyZhangGe（DepartmentofAgronomy）Supervisor:LiuHaobaoQingdao.ChinaJune,2018独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得青岛农业大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所

3、做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：时间：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解青岛农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件和磁盘，允许论文被查阅和借阅，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文。同意青岛农业大学可以用不同方式在不同媒体上发表、传播学位论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签名：时间：年月日导师签名：时间：年月日青岛农业大学硕士学位论文摘要雪茄外包皮烟发酵中优势微生物筛选及功能研究摘要发酵是烟叶品质形成的关键环节。目前，人们普遍接受的发酵机理有氧化作用、酶作用和微生物作用三

4、大作用机理。随着技术发展和研究深入，发现微生物（尤其是细菌）在烟叶发酵中起着重要的作用。本文主要以雪茄外包皮烟叶为研究对象，初步研究雪茄外包皮烟叶中细胞壁物质含量、分析了不同地区雪茄外包皮烟叶表面细菌多样性及功能、表征了雪茄外包皮烟叶发酵过程中细菌群落演替，主要研究结果如下：（1）利用烟草行业标准方法对雪茄外包皮烟叶侧脉及叶肉样品中细胞壁物质含量进行测定比较，发现侧脉及叶肉中果胶和纤维素含量较高，且两者在侧脉及叶肉中含量差异较大：侧脉中果胶含量约8%-18%，叶肉中果胶含量约2%；侧脉中纤维素含量约20%-35%，叶肉中纤维素含量约10-20%；其余细胞壁物质总体含量较低：侧脉中半纤维素

5、比叶肉中含量低，木质素在侧脉中约3%，叶肉中含量约2%。（2）利用微生物常规分离方法对美国、巴西、多米尼加及中国七个地区雪茄外包皮烟样表面细菌进行分离鉴定，并对筛选细菌的功能活性进行初步测定。结果共分离获得细菌100株；属水平上不同地区雪茄外包皮烟叶表面细菌多样性及数量不同，但基本以芽孢杆菌和葡萄球菌属为主，尤其芽孢杆菌属为优势菌属。细菌种类多米尼加>美国-2=中国-1>巴西-1>巴西-2>中国-2>美国-1；分别筛选到具有纤维素酶、果胶酶和蛋白酶分泌功能菌株24株、20株和22株，耐烟碱菌株46株，有7株芽孢杆菌同时具有上述四种活性，为雪茄烟的微生物发酵提供了菌株。（3）采用Illum

6、inamiseq高通量测序技术(High-ThroughputSequencing,HTS)和传统微生物分离方法，对墨西哥不同发酵时期雪茄外包皮烟叶表面细菌群落结构、丰富度及演替规律进行深入研究。结果表明：墨西哥雪茄外包皮烟叶表面细菌群落组成丰富，主要为棒状杆菌属(Corynebacterium)、葡萄球菌属(Staphylococcus)、不动杆菌属(Acinetobacter)、假单胞菌属(Pseudomonas)、芽孢杆菌属(Bacillus)等；细菌群落结构随发酵进程而变化，优势微生物由棒状杆菌属(44.64%)和假单胞菌属(40.88%)演替为后期的葡萄球菌属(72.78%)。

7、1号样品（FJQY-1）和2号样品（FJQY-2）的细菌群落具有较高的丰富度；2号样品（FJQY-2）、3号样品（FJQY-3）和4号样品（FJQY-4）三个样品细菌结构及丰度相似，以葡萄球菌属为主；传统分离结果显示：不同发酵时期雪青岛农业大学硕士学位论文摘要茄外包皮表面细菌主要为芽孢杆菌属(55.10%)和葡萄球菌属(22.45%)，传统微生物分离方法与高通量测序技术相比，高通量测序技术表征细菌群落多样性及演替规律更全面。关键词：