新型壳聚糖基组织工程角膜基质支架制备和性质的研究

《新型壳聚糖基组织工程角膜基质支架制备和性质的研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、新型壳聚糖基组织工程角膜基质支架的制备和性质研究于两要目的：角膜基质上部通过前弹力层与上皮层相连，下部通过后弹力层与内皮层相连，占角膜厚度的90％，是角膜的主要构成部分，对维持角膜的正常结构和透明性至关重要。角膜基质层由胶原纤维形成的板层规则的平行排列而成，基质层的主要细胞是角膜基质细胞。在当前供体角膜来源少，角膜移植本身亦存在异体排斥反应的情况下，寻找新的角膜来源成为重要的课题。角膜基质的构建是开展角膜组织工程的工作的前提。本论文采用生物来源的材料，包括羟丙基壳聚糖、明胶和硫酸软骨素，利用它们优良的生物相容性和可生物降解性，构成人工模拟的角膜基质的支架

2、材料。通过测定和比较这种材料与角膜相关的理化性质，在细胞和组织水平检验其生物相容性和可降解性，旨在全面验证其构建组织工程角膜基质的应用前景。方法：对兔角膜基质细胞进行原代和传代培养，提供合适的细胞供材料研究使用。将羟丙基壳聚糖、明胶和硫酸软骨素按不同比例混合后调pH值交联，冷冻干燥处理后再加热干燥，制成支架材料。对获得的7组材料进行细胞水平评价，筛选出最适合兔角膜基质细胞生长的一组。测定支架材料的透光率、含水量、通透性、力学性质、结构等理化性质，进一步运用L929细胞采用MTT法评估其浸提液的细胞相容性，运用CFSE．PI双荧光染色观察人角膜基质细胞分布

3、。在此期间，设定了含有和不含硫酸软骨素的两组材料，利用扫描电镜和激光共聚焦扫描显微镜等对硫酸软骨素(CS)对细胞生长的影响进行比较。组织水平的评价，采用大鼠肌肉、皮下植入，兔角膜板层囊袋植入三种方式进行。对实验动物实行日常护理观察照相，定期进行组织切片的HE染色观察。结果：选择原代和传代l、2代细胞作为稳定的细胞来源。利用光镜和扫描电镜观察，筛选出了最适合兔角膜基质细胞生长的材料组。扫描电镜及HE染色显示，材料的表面为片层状相连，内部结构疏松。支架材料的在可见光范围的透光率为83‰88％；含水量达到96％；对NaCl和葡萄糖均有良好的通透性；干湿态的抗张

4、强度分别为1264KPa和31．4KPa，断裂伸长率分别为5．9％和11．O％。材料的浸提液对L929细胞无细胞毒性。激光共聚焦扫描电镜结果显示，人角膜基质细胞分布在材料的约1／4垂直距离范围内；人角膜基质细胞贴附生长能力在新型壳聚糖基组织工程角膜基质支架的制备和性质研究含有CS情况下更为优越。支架材料在大鼠肌肉、皮下及兔角膜板层囊袋的相容性均良好，其中在肌肉中降解较快。结论：本研究以羟丙基壳聚糖、明胶和硫酸软骨素为原料，交联合成的载体支架材料，与角膜基质细胞的相容性良好，不过材料在组织内的降解速度较快，并且机械强度较低，尚需进一步研究改进。关键词：角膜

5、基质；支架；生物相容性；羟丙基壳聚糖；明胶；硫酸软骨素2新型壳聚糖基组织工程角膜基质支架的制备和性质研究PreparationandpropertiesofanoVelchitosanbasedscaf协ldsforcomealstromaintissueengineeringAbstractPu叩ose：Comeals们maist11ecentralpartofcomea，wmchrepresentsalmost90％ofthetotalthickness．Comeals仃omaisconnectedwithepitheli啪throughBowman

6、’smembrane，a11dwithendotheli眦tllrou曲Descemet’smembraJle．Parallelcollagenfibersf．onnedcomealstromall锄eUarstlllctLlreisanessentialelementofnonnalcomealstructureanditstransparency．Keratocytearetllemaincellsofcomealstromaandlocatebet、^，eenl锄ellarlayerS．The1ackofcomealdonorsa11dimmuno

7、logicalrejectionaRerallo伊aRtmsplantationbothmakeitimponaIltforresearcherstofindanewsourceofcomea．Andt11econstmctionofcomealstromaisthefirststeptowardsbuilding向ll-layercomea．Inthisdissertation，threebiomaterials，namelyhydroxypropylchitosan，gelatina11dchondroitinsulfatewerechosenbec

8、auseoftheiroutstandingbiocompatibilityan