异土木香内酯的抗肺癌作用及其机制的研究

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1、广东药科大学硕士研究生学位论文分类号：___________密级:__________UDC:___________异土木香内酯的抗肺癌作用及其机制的研究姓名：蔡肇栩学号：2111540123院系：药学院专业：药学研究方向：药物研发与转化导师姓名：臧林泉论文提交日期：2018年3月论文答辩日期：2018年5月学位授予单位：广东药科大学二○一八年三月广东药科大学硕士研究生学位论文Studyofanti-lungcancereffectandthemechamismofIsoalantolactoneCandidate：

2、CaiZhaoxuStudentID：2111540123Affiliation：SchoolofPharmacyAcademicDegreeApliedfor：ProfessionaldegreeofpharmacySpeciality：PharmacySupervisor：Prof.ZangLinquanAssistantSupervisor：ProfessrialResearchXuwendongDayofDefence：March2018Degree-Conferring-Institution：Guangd

3、ongPharmaceuticalUniversityMarch2018广东药科大学硕士研究生学位论文广东药科大学硕士研究生学位论文异土木香内酯抗肺癌作用及其机制研究摘要背景肺癌在全球肿瘤相关死亡原因中占据首位，每年新确诊肺癌患者约达160万，而且发病率和死亡率依然呈上升趋势，尤其在中国等发展中国家。根据2018年美国癌症协会（ACS）发布的结果显示，预计2018年全美将有约174万的新发癌症病例和约61万人死于癌症。国家中央癌症登记中心的数据指出，预计我国仅在2015年共有约429.2万新发肿瘤病例和约281.5万

4、癌症死亡病例，其中肺癌的发病率和致死率均位列第一。目前，癌症的临床治疗主要是以放疗、化疗和手术治疗为主，而对于晚期肺癌患者无法通过手术根治，只能进行放化疗或靶向治疗。现有的化疗药物主要以细胞毒类为主，其副作用大且容易耐药，对于肿瘤患者五年生存率和生存质量并无明显提高。对于靶向治疗，由于其靶标单一使适用人群范围较窄，而且也较易出现耐药性。由此可见，开发有效，低毒及多靶点作用的抗肿瘤药物刻不容缓。传统中药是我国的瑰宝，是先人们无数次与疾病做斗争的过程中留下的宝贵经验和财富，而且在临床上抗肿瘤治疗方面已取得显著效果。因此，

5、本文选取由中药土木香分离提纯得到的异土木香内酯进行抗肿瘤及其作用机制的探讨，为新药开发提供可靠的理论基础。本论文实验内容主要涉及三个部分：Ⅰ广东药科大学硕士研究生学位论文第一部分：异土木香内酯的体外抗肿瘤药效学研究MTT法证实了异土木香内酯对肺癌细胞有增殖抑制作用，结果表明SPC-A1与H1650细胞株不同时间（24h，48h，72h）的IC50分别是12.37、10.94、7.09μM/L和29.53、12.75、11.01μM/L，可发现其增值抑制作用呈剂量和时间依赖性。而不同时间（24h，48h，72h）作用于

6、人胚胎成纤维细胞MRC-5的IC50分别是124.10、54.12、28.20μM/L，可见与肺癌细胞的增殖抑制作用进行相比，我们认为异土木香内酯对肺癌细胞有一定的选择性作用。第二部分：异土木香内酯的体内抗肿瘤药效学研究用SPC-A1对裸鼠进行皮下接种，成功构建荷瘤裸鼠模型。异土木香内酯高（90mg/kg）、中（30mg/kg）、低（10mg/kg）分别作用于荷瘤裸鼠，以顺铂作为阳性对照，并以肿瘤体积抑制率和肿瘤重量抑制率作为对比依据。结果发现异土木香内酯（高、中、低）给药组体积抑制率分别是48.44%、28.83%

7、、11.77%，而肿瘤重量抑制率则分别是58.13%、32.94%、19.17%。实验结果证实异土木香内酯能抑制裸鼠体内肿瘤生长且呈现剂量依赖性，通过脏器系数和体重生长曲线发现其安全性高于阳性对照组顺铂。第三部分：异土木香内酯抗肿瘤的作用机制研究在本部分的实验中，我们先是采用Hocechst33258染色法观察细胞给药后的形态学变化，结合FITC-AnnecinV/PI法检测细胞凋亡，发现异土木香内酯诱导细胞凋亡呈剂量和时间依赖性，随着给药浓度的增加和作用时间的延长，细胞凋亡率越高。接着，我们还通过了JC-1Ⅱ广东药

8、科大学硕士研究生学位论文染色法检测肿瘤细胞线粒体膜电位的变化、DCFH-DA染色检测活性氧变化和碘化丙染色检测对细胞周期的影响。由此发现了异土木香内酯能降低细胞内线粒体膜电位和升高其细胞内活性氧水平，而且能把细胞周期阻滞在S期。最后，通过Wesrernblot和免疫组化结果证明了异土木香内酯能激活细胞内P-AMPK（Thr172）、P53、P2