鸭细小病毒04nb株的分离鉴定与rep基因测序与分析

《鸭细小病毒04nb株的分离鉴定与rep基因测序与分析》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、第21卷2期中国病毒学21（2）：173-1772006年3月VIROLOGICASINICAMarch2006*鸭细小病毒04Nb株的分离鉴定与rep基因测序与分析**张彦鹏，李静，寇铮，陈绳亮，范兆军，张忠，李天宪（中国科学院武汉病毒研究所病毒学国家重点实验室，湖北武汉430071）IsolationandIdentificationofDuckParvovirus04NbStrainandSequenceAnalysisofrepGeneZHANGYan-peng，LIJing，KOUZheng，CHENSheng-liang，FANZhao-ju

2、n，**ZHANGZhong，LITian-xian(TheStateKeyLaboratoryofVirology,WuhanInstituteofVirology,ChineseAcademyofSciences,Wuhan430071,China)Abstract：AseverecontagiousdiseasebrokeoutinseveralduckeriesinNingbo,Zhejiangprovincewiththesymptomsofdiarrheaandgrasping.Thelivertissuesfromthedeadducksw

3、erecollectedandinoculatedintotheallantoiccavityofthe11-day-oldembryos.Throughpurificationbysucrosedensitygradientcentrifugation,adiameterof20nmvirionswithtypicalduckparvovirus(DPV)characterswasobservedbyelectronmicroscopy.Inthetestofagar-gelimmunodiffusion,thereactionbetweenthest

4、ufffromdeadembryosandpositiveserumwasobvious.ThroughSDS-PAGE,threemainsegmentswerevisiblewhichcoincidedwithDPV.Inanimaltest,similarsymptomswerealsoobserved.UsingtheprimersdesignedaccordingtoDPVgenome,weacquiredananticipative600bpDNAfragment,whichwasclonedintoE.coliandsequenced.Th

5、esequenceshared98%identitywiththerepresentativeDPVstrain.Fromallaboveresults,thepathologicagentwasdiagnosedasDuckParvovirus.Toacquiremoreinformationoftherepgene,wesequencedandaligneditwith4othersequencesofDPVorgooseparvovirus(GPV)fromGenBank.Theresultindicatedthehomologyofrepgene

6、wasabout98%withDPVand81%withGPV.Keywords：Duckparvovirus;Isolationandidentification;repgene;Homology摘要：采集浙江宁波地区以腹泻、呼吸困难为主要症状的病鸭肝组织，接种正常鸭胚尿囊腔增殖病毒。雏鸭感染试验显示发病症状及病理变化明显，死亡率为75%。电镜下可见纯化病毒直径约20nm左右的球形病毒粒子。免疫琼脂扩散实验结果显示与鸭细小病毒（duckparvovirusDPV）标准株阳性血清有明显沉淀线。经SDS-PAGE呈现3条结构蛋白带，与DPV标准株一致；参照

7、GenBankDPV非结构蛋白基因序列设计引物，PCR扩增反应获得目的条带，克隆测序后，与DPV代表株序列同源性达98%。根据上述实验结果，确定引起本次鸭场疫病的病原为DPV。为进一步研究该分离株rep基因的序列特征，对其rep基因克隆测序，与GenBank中两株DPV、两株鹅细小病毒（GPV）进行序列比对，结果显示rep基因核苷酸序列与DPV参考毒株同源性为98%以上，与GPV同源性为80%左右。关键词：鸭细小病毒；分离鉴定；rep基因；同源性中图分类号：S831.7文献标识码：A文章编号：1003-5125(2006)02-0173-05鸭细小病毒病

8、由鸭细小病毒（Duckparvovirus，感，临床症状主要表现为渗出性肠炎，死