缺氧下绒癌jeg-3细胞hif-1α及vegf的表达及其对侵袭能力的影响

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1、中图分类号R711UDC610硕士学位论文学校代码10533缺氧下绒癌,IEG．3细胞HIF．1a及ⅦGF的表达及其对侵袭能力的影响TheexpressionsofHIF··1alphaandVEGFandtheeffectoninvasivenessinhumanchoriocarcinomaJEG--3celllineinHypoxiccondition作者姓名：李林夕学科专业：临床医学研究方向：妇产科学学院(系、所)：湘雅医院指导教师：刘惠宁教授论文答辩日期塑f兰苎!巧答辩委员会主席中南大学二零一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论

2、文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：堑挝日期：盘12年』月丛日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同

3、时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。缺氧下绒癌JEG．3细胞HIF．1Q及VEGF的表达及其对侵袭能力的影响摘要目的观察氯化钻(CoCl2)在体外模拟缺氧对绒癌JEG．3细胞增殖能力的影响，进而确立合适的绒癌JEG．3细胞的体外缺氧模型。并在该缺氧模型基础上观察不同程度缺氧对绒癌JEG-3细胞侵袭能力的影响，并探讨可能的影响机制。方法(1)经不同浓度的COCl2(O、50、100、150、200lgnol／L)和不同作用时间(24h、48h、72h、96h)培养诱导绒癌JE

4、G．3细胞缺氧，用CCK．8法检测缺氧对绒毛膜癌JEG．3细胞增殖活性的影响。(2)1501amol／1浓度的CoCl2分别作用绒癌JEG．3细胞24h、48h、72h建立绒癌JEG．3细胞体外缺氧模型。运用荧光定量．聚合酶链反应(realtime-polymerasechainreaction，realtime．PCR)及蛋白免疫印迹(Westemblotting)方法，分别检测各实验组绒癌．1EG．3细胞的HIF．1a及VEGF的mRNA和蛋白水平的表达；运用transwell侵袭实验检测各实验组绒癌JEG．3细胞的侵袭能力。结果(1)用C

5、CK-8测定在不同浓度CoCl2作用不同时间下的绒癌JEG．3细胞的增殖活性。结果示在一定浓度下(<150眦aol／1)和作用II时间(72h)范围内，CoCl2诱导的缺氧可以一定程度的促进绒癌JEG一3细胞的生长增殖，并呈浓度和时间的正相关性；而当作用浓度增加(达至02009rnol／1)或延长处理时间(96h)时均会不同程度的降低JEG．3细胞的增殖活性。(2)real．time．PCR检测结果示缺氧不能刺激HIF．10tmRNA的表达增加。缺氧24h组、缺氧48h组、缺氧72h组的HIF—lotrnRNA的表达分别为常氧对照组的HIF—l

6、otmRNA表达的1．17倍、O．98倍、1．04倍。HIF．10t的下游重要靶基因VEGF随着诱导缺氧时间的延长(24h、48h、72h)其mRNA表达水平逐渐增高。缺氧24h组、缺氧48h组、缺氧72h组的VEGFmRNA的表达分别为常氧对照组VEGFmRNA表达的2．62倍、4．79倍、5．66倍。(3)蛋白免疫印迹Westernblotting检测结果示在缺氧下HIF-lot及VEGF蛋白水平的表达均增强。HIF．1a在缺氧24h时的蛋白表达相对灰度值为(0．42+0．01)，并在缺氧48h时蛋白表达最高。缺氧48h组(0．64士0．0

7、3)与缺氧72h组(0．65+0．02)间差异无统计学意义(p>o．05)。各缺氧组与常氧组(0．26+0．01)比较，差异有统计学意义(p<0．05)。绒癌JEG．3细胞中VEGF蛋白水平的表达随着缺氧时间延长表达逐渐增强。其中，常氧组VEGF蛋白表达灰度值为(0．28+0．02)，缺氧24h组为(0．46+0．02)，缺氧48h组为(O．94+0．03)，缺氧72h组为(1．26+0．02)。各缺氧组与常氧组比较差异均有统计学意义(p<0．05)。缺氧各组分别与其前一缺氧时间组比较，差异均有统计学意义(p<0．05)。III(4)Trans

8、well侵袭实验测缺氧下绒癌JEG．3细胞侵袭力的变化。Transwell结果显示在400x下观察．1EG．3细胞的穿膜细胞数分别为常氧对照组(31士