水牛卵泡液蛋白质组学研究

《水牛卵泡液蛋白质组学研究》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、分类号盟堕譬岁UDC硕士学位论文密级绰水牛卵泡液蛋白质组学研究潘秋庄学科专业动物遣鱼直弛墨鏊殖指导教师鲎盟教援论文答辩日期垫!；：』!!学位授予日期望12：丛生答辩委员会主席盈坌坠堡塾I螂㈣广西大学学位论文原创性和使用授权声萌本人声明所呈交的论文，是本人在导师的指导下独立进行研究所取得的研究成果。除已特别加以标注和致谢的地方外，论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写的研究成果，也不包含本人或他人为获得广西大学或其它单位的学位而使用过的材料。与我一同工作的同事对本论文的研究工作所做的贡献均已在论文中作了明确说明。本人在导师指导下所

2、完成的学位论文及相关的职务作品，知识产权归属广西大学。本人授权广西大学拥有学位论文的部分使用权，即：学校有权保存并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅，可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索和传播，可以采用影印、缩印或其它复制手段保存、汇编学位论文。本学位论文属于：口保密，在年解密后适用授权。砾保密。(请在以上相应方框内打“√”)论文作者签名：泓弦日期：加I；．厶I厂指导教师签名：衫多以日期：沙J；、6-I厂作者联系电话：?9∑忙名厂磐‘名9电子邮箱：f妒厶巧；≥；；7固仫．洲广西大学

3、硕士学位论文水牛卵泡液蛋白质组掌研究水牛卵泡液蛋白质组学研究摘要本试验以广西沼泽型水牛卵泡液作为研究对象，采用双向凝胶电泳技术结合质谱分析水牛成熟卵泡液及未成熟卵泡液之间蛋白表达的差异。试验共分为三个章节：第一章是建立和优化水牛卵泡液蛋白质的双向电泳体系，第二章是分离和鉴定水牛成熟卵泡液及未成熟卵泡液之间的差异蛋白质，第三章首先去除水牛成熟及未成熟卵泡液高丰度蛋白，然后再进行二者之间差异蛋白质的分离及鉴定。试验一：通过对蛋白质处理方法、IPG胶条的长度及PH值、上样量等参数进行比较及优化，建立适合于水牛卵泡液蛋白质分离的双向电泳体系

4、。结果显示，经丙酮沉淀法处理得到的水牛卵泡液总蛋白，在24cm、PH4～7的IPG胶条且上样量350l-tg时可以得到质量较好、分辨率较高的双向电泳图谱，应用ImageMaster2Dplatinum软件对图像进行分析检测，可得到将近280个蛋白质点。试验二：采用前面建立及优化的双向电泳体系，对水牛成熟及未成熟卵泡液总蛋白质进行分离，应用ImageMaster2Dplatinum软件对二者的凝胶图谱进行匹配分析，得到光密度值差异倍数在3倍以上的差异表达蛋白点25个。以成熟卵泡液蛋白质作为对照组，其中13个蛋白质在未成熟卵泡液中表达上

5、调，6个蛋白质表达下调，2个蛋白质缺失，4个蛋白质在未成熟卵泡液中特异性表达。质谱最终鉴定出lO个蛋白质：锌指蛋白674、过氧化物酶．2、溶酶体运输调节因子、驱动蛋白、醛糖还原酶、牛纤维蛋白原晶体结构、转甲状腺素蛋白、核苷二磷酸激酶、O【．氨基己二酸半醛脱氢酶、抑制素O【链前体。试验三：首先分别对水牛成熟及未成熟的卵泡液样品进行高丰度蛋白水牛卵泡液蛋白质组掌研究去除试剂盒处理，然后同样采用试验一中已经建立及优化的双向电泳体系，对经过试剂盒处理的水牛成熟及未成熟卵泡液蛋白样品进行分离鉴定，共筛选出21个差异表达蛋白点，其中10个蛋白质

6、在未成熟卵泡液中表达上调，7个蛋白质表达下调，3个蛋白质表达缺失，1个蛋白质在水牛未成熟卵泡液中特异性表达。有4个蛋白点被质谱成功鉴定出来，对应4种蛋白质：硫酸化糖蛋白、纤维蛋白原D片段晶体结构、转铁蛋白、触珠蛋白。本研究通过建立及优化水牛卵泡液双向电泳体系，为后续卵泡液蛋白质的分离提供良好的试验基础。采用两个试验最终分析并鉴定出一批水牛成熟卵泡液及未成熟卵泡液之间的差异表达蛋白质，为研究水牛卵母细胞的发育微环境及成熟机制提供新的研究线索。关键词：水牛卵泡液蛋白质组双向电泳质谱鉴定广西大学硕士学位论文水牛卵泡液蛋白质组掌研究PROT

7、EOMICSSTUDYOFBUFFAL0FOLLICULARFLUIDSABSTRACTThisstudywasundertakentoevaluateproteinexpressiondifferencesbetweenmatureandimmaturefollicularfluidsofswampbuffaloinGuangxi．Theresearchusedtwo-dimensionalgelelectrophoresis(2DE)coupledtoMatrixAssistedLaserDesorption／Ionizatio

8、nTime-of-flightTandemMassSpectrometry(MALDI-TOF／TOF)toanalyzethedifferentproteins．Thethesisconsistsofthreechapters：th