麻疯树新基因jcpip的分子克隆与功能研究

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1、匝用研究麻疯树新基因儿尸俨的分子克隆与功能研究张颖1，2江璐玎1王云霄1牛蓓1陈放“(1生物资源与生态环境教育部重点实验室(四川大学生命科学学院)2海南师范大学生物系)摘要：从大戟科耐旱植物麻疯树cDNA中克隆得到了一个麻疯树质膜内膜蛋白(PIP)新基因(如P，P)。其cRNA在非洲爪蟾卵母细胞(Xerwpusoocytes)中异源表达后发现细胞膨胀率扩大了10倍。聚类分析表明，麻疯树PIP蛋白与蓖麻、葡萄和菠菜PIP蛋白在进化上有最近的亲缘关系。半定量RT—PCR研究表明该基因在植株的整个生长发育期都有表达。但干旱

2、胁迫下JcPlP基因表达量没有显著变化。关键词：水通道蛋白；功能分析；干旱胁迫CloningandFunctionofaNewAquaporinGeneLJcPH、fromJolrophaCurcasf?ZHANGYing，JIANGLu—ding．WANGYun-xiao，NIUBei，CHENFangAbstract：AmplifiedbyPCRwithdegeneratedprinler$，anewplasmamelnbraneintrinsicproteingene(JcPIP)w∞clonedfromthe

3、cDNAofJatrophacurch'l*．ThecRNAof．kPIPwasheteroexpressioninXenopusoo州咄asawaterchannelandin—creasedrate10timesindicatedthatPIPsofCID'CaSWfl．qtelationtoR／cinwcorn-swellisghigherPbylogenieanalysisJatrophaitWaSineachofmunLs．Vitissinlferaand如imtciaoleFctceaclosely．Se

4、mi．quantitativePCRanalysisshowedexpressedphaseJatrophacttrc(L‘growthFurthermore，therewerenoobviouslychangesinPIPsexpressionlevelsunderdroughtstress．Keywords：Aquaporin；Functionanalysis；DroughtstressFirstallthor’saddress：KeYLaboratoryofBio．resourcesandEco．environ

5、ment．MinistryofEducation，CollegeofLifeSci—ence．SichuanUniversity，610064．Chengdu，China植物水通道蛋白(Aquaporin)介导细胞与介质之幼根、花、幼嫩果皮、成熟胚乳，液氮保存。收集成熟间快速的被动的水分运输，是水进出细胞的主要途麻疯树种子用于温室培养。非洲爪蟾卵母细胞由四径⋯。其广泛存在于高等植物的质膜及液泡膜上，川大学华西实验室培养。其含量及活性的调控可能是植物体在水分亏缺条件1．2RNA提取下调控水分交换的重要方式之一。麻疯树(

6、Jatropha用皂土法I21从麻疯树幼嫩叶片、幼茎、幼根、花、curcas)是一种具有较大经济开发潜力的大戟科的油幼嫩果皮、成熟胚乳中提取总RNA。料植物，主要分布在热带和亚热带地区。在我国也有1．3PCR和RT．PCR扩增广泛的分布。由于繁殖生长快，喜暖热气候，尤其耐于RT—PCR按TaKaRa公司AMV反转录酶操作手旱、贫瘠，麻疯树已成为我国干热河谷地区荒山绿化、册进行。分析高等植物水通道蛋白基因序列，设计一保永固土的重要树种。为进一步研究其抗旱机理，为对简并引物用于PCR和RT-PCR的扩增。其序列分育种工作

7、提供理论指导，本实验室克隆了一个麻疯树别是：Pl：CGG(C／T)ATA(A／T)CTGG(A／T)GG(A／水通道蛋白新基因^尸，P(Jatrophacurca$Plasmamen—T)c，172：CACCGAA(G／C)CT(A／T／C)CT(C／T)GC。扩增体系为5IxLl0XPCRbuffer、lUExTaqTM聚合braneintrinsicprotein)。在异源表达系统非洲爪蟾卵酶、0．2mmol／LMgCl2、0．2mmoL／LdNTPs引物各母细胞中对编码蛋白的功能进行了鉴定，发现该基因编码一个功

8、能水通道蛋白。同时对干旱胁迫条件下植150ng、100ng模板、双蒸水加至总量为50血。株JcPIP的表达情况进行r进一步的研究。ExTaqTM聚合酶等试剂购自大连宝生物工程有限公司。反应程序为94％预变性8min，94‘E变性40S，1材料与方法1．1材料55℃退火45S，72℃延伸1．5min，共35个循环，72℃延伸10min后4。C保存