关节软骨损伤生物标志物蛋白质组学初步的研究

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1、目录㈣㈣嗍㈣洲0㈣矾Y。1901080中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．4研究论文关节软骨损伤生物标志物的蛋白质组学初步研究引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．7第一部分关节软骨损伤模型构建及其生物学的特点前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．9fjIJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．j⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯．．10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．14附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．18附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．24讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．25小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．28参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．29第二部分应用SELDI．TOF．MS技术检测关节软骨损伤生物标志物血清、关节液蛋白表达谱前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．32日IJ舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．32材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．35结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．38附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．39附表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．43讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．45小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．48参考文献

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．49结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．51综述膝关节软骨损伤的研究现状及进展⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．52致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．60个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．61中文摘要关节软骨损伤生物标志物的蛋白质组学初步研究摘要目的：改良的Hulth造模方式建立关节软骨损伤模型，观察软骨损伤的大体和微观状态下特点，采用蛋白质组学质谱：表面增强激光解吸离子化

5、飞行时间质谱(SELDI—TOF—MS)技术筛选关节软骨损伤的血清、关节液生物标志物。方法：选取新西兰大白兔20只为软骨损伤模型组。软骨损伤模型组：无菌条件下，沿兔膝关节内侧行纵型切口，长约4cm，暴露膝关节，切断前后交叉韧带及内侧副韧带，完整切除内外侧半月板，保留关节软骨面。术后自由活动，不固定伤肢。30min／d分2次驱赶，连续lO周。以不做任何处理15只兔膝关节为正常对照。造模后4，8，lO周时做Mankin评分、大体外观及电镜、光镜观察关节软骨的病理特点，并以X线检查关节软骨损伤情况。同时软骨

6、损伤模型组和正常对照组兔处死，抽取血清、关节液，4℃室温条件下静置1h，然后4。C室温条件下离一t二,10min，速度：血清调整为3000r／min，关节液1000r／min，吸取血清、关节液30ul，分装0．5mlEP管中，置于．80℃冰箱保存。用金属离子交换芯片(IMAC3．Cu)和弱阳离子交换芯片(CMl0)结合表面增强激光解析电离飞行时间质谱技术分析关节软骨损伤后血清、关节液中蛋白质谱的改变，寻找到关节软骨损伤的生物标志物。结果：1关节软骨损伤模型的建立及各期生物学的特点：(1)正常对照组，大

7、体组织学观察，关节面光滑平整，光泽明亮，无裂纹及软化灶；关节边缘齐整规则，无骨赘形成；HE图片显示成熟软骨细胞核小而圆，可见1~2个核仁，胞质弱嗜碱性，大小分布均匀，软骨周边部分为幼稚软骨细胞，较小，呈扁圆形，常呈单个分布。越靠近软骨中央，细胞越成熟，体积逐渐增大，变成圆形或椭圆形；电镜超微结构，软骨细胞和细胞核为椭圆形或近圆形的盘状结构，细胞表面有突起和皱褶，细胞核较大。胞质内可见丰富的粗面内质网和高尔基复合体，线粒体较少，细胞基质为半透明的环形带，基质中胶原纤维细而密，呈交织状，证明软骨细胞具有分

8、泌软骨基质的能力；中文摘要Mankin评分为O分，放射X线示关节间隙正常，无骨刺、骨赘生成，关节面平滑，未见明显异常。(2)建模4周时改变：与正常对照组相比，大体外观可见早期关节软骨病变：表现为关节软骨外观透明，色泽暗淡发黄；关节面轻度粗糙，有糜烂、软化灶；有少量滑膜充血增生，关节液增多；HE染色软骨表层不平整，层次出现不连续，软骨基质遭受破坏，基质轻染，出现纤维化，未伤及软骨下层：细胞轻度肥大增生，细胞核深染、变大，有软骨陷窝吸收现象，可见部分坏死软骨