中国人群hla特异hcmv串联表位腺病毒核酸疫苗制备及免疫效果评价

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1、山东大学博士学位论文中国人群HLA特异的HCMV串联表位腺病毒核酸疫苗的制备及免疫效果评价专业：内科学(血液病)博士研究生：赵平导师：纪春岩教授中文摘要研究背景人巨细胞病毒(Humancytomegalovirus，HCMV)是人类先天性病毒感染的最常见病原体，人是其唯一的宿主。根据社会经济状况和地理位置的不同，人群中抗HCMV血清阳性率可达50％"90％。一般情况下，HCMV原发感染为隐性感染，无明显的临床症状，终生携带，病毒周期性地从黏膜部位释放。在器官和造血干细胞移植、肿瘤、艾滋病等免疫低下人群中，体内潜

2、伏的病毒重新激活，引起HCMV活动性感染，其感染率约为50％～75％，死亡率约是25％t11，一般于术后l～4个月内发生，是器官移植失败和移植受体死亡的重要原因。对于孕妇来说，HCMV原发或复发感染均可引起胎儿宫内感染或围产期感染，而导致畸形、智力低下和发育迟缓，感染率达0．3．2．4％，其中发病率达15％．30％【2】。在美国每年有8000名HCMV原发感染的婴儿出生，其中有10％'--'17％的婴儿出现耳聋或神经系统后遗症【31。在我国因先天HCMV感染造成的先天畸形患儿约4万人左右，占每年我国出生缺陷儿的

3、6．2％。巨细胞病毒的生物学特征HCMV属于肛疱疹病毒亚科，为双链线状DNA病毒，直径约为120"-'300nm，核酸为235kb的双股线性DNA，有213个开放读码框，其中有165个编码基因，Vamum等【4】证明HCMV病毒颗粒由59种结构基因编码的产物与众多宿主蛋白构成，是疱疹病毒中最大的，具有严格的种属特异性。其基因由长的独特序列(UL)、短的独特序列(US)及存在于卜S连接部位的重复序列组成，可构成4种同分异构体，至少编码氨基酸残基数100以上的多肽200余种，包括原始基因产物、中间产物及终末产物。H

4、CMV基因的转录及表达有一定的时序性，可分为即刻早期(IE)、山东大学博士学位论文早期(E)和晚期(L)基因3种类型。其中，对病灶具有重要监测和检测功能的是IE和L。即刻早期基因是HCMV原发感染或复发感染后最先表达的基因。IE蛋白在HCMV基因表达的后续调控过程中起着主导作用。晚期基因的转录和表达一般发生在感染后36"--48h。在HCMVDNA开始复制后，L基因合成病毒的结构蛋白，包括衣壳、被膜和包膜蛋白。因此，L基因表达意味着病毒的装配及成熟，是病毒感染的后期结果。而L基因mRNA可作为特异性的活动感染的

5、诊断指标。HCMV对宿主或培养细胞有高度的种特异性，HCMV只能感染人，及在人纤维细胞中增殖。病毒在细胞培养中增殖缓慢，复制周期长，初次分离培养需30"---40天才出现细胞病变，其特点是细胞肿大变圆，核变大，核内出现周围绕有一轮“晕”的大型嗜酸性包涵体。HCMV几乎感染所有器官，血管系统(内皮细胞和平滑肌细胞)【5】、循环淋巴细胞、单核细胞和多形核白细胞、成纤维细胞是其主要的潜伏部位，一旦病毒进入细胞，病毒衣壳粘附于胞膜，借其包膜蛋白(gB和gH)与细胞表面受体(低结合力的肝素受体和高结合力的蛋白受体)结合后

6、，通过受体介导的机制进入细胞内。也可通过其他途径如直接穿过胞浆膜进入细胞内，然后病毒基因组与宿主细胞核结合。HCMV有以下方式存在于宿主中，①病毒基因整合到宿主细胞基因组内，不表达病毒抗原和装配病毒颗粒，随着细胞基因复制而转移到子代细胞内，直接处于潜伏状态。②病毒在宿主细胞内复制引起细胞病变，形成核内或／和浆内包涵体，至细胞溶解凋亡，形成产毒型感染。⑨病毒有少量复制，靶细胞功能发生障碍，但无或极少细胞病变，引起不全感染。④宿主细胞可表达病毒抗原，导致宿主细胞转化和增生，可能参与其致癌机制。@)HCMV感染除直接

7、导致终末器官病变外，还在统计学上与移植排斥、细菌或真菌的二次感染、动脉粥样硬化加速等发生有密切关系，这些状况被称为HCMV的间接效应。病毒侵入肺、肝、肾、唾液腺、乳腺其他腺体，可长期或间隙地自唾液、乳汗血液、尿液、精液、子宫分泌物多处排出病毒。通过口腔，生殖道，胎盘，输血或器官移植等多途径传播。HCMV可通过胎盘感染胎儿，影响妊娠，一是病毒在绒毛细胞内增殖后进入胎儿血中并感染之，另一种方式即为病毒在绒毛细胞内不发生增殖而仅是通过或溢出。器官移植患者最常见的感染是HCMV，主要是通过供体器官传播或受体潜伏的HCM

8、V激活。2山东大学博士学位论文HCMV的致病机制1．HCMV潜伏感染形成的机制：受染的细胞为HCMV非容纳细胞，HCMV进入受染细胞首先必须通过细胞表面的病毒相应受体。HCMV进入细胞后能否完整复制则取决于受染细胞的分化成熟程度。凡阻碍或不能使HCMV完整复制成具感染性病毒颗粒的细胞，则为非容纳性细胞。Sinclair等【6】指出，外周血单核细胞之所以成为HCMV潜伏感染的细胞是因为在