呼吸道感染细菌联合疫苗制备及免疫效果评价

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1、中图分类号：R392.12论文编号：HBLG2015-008UDC：密级：公开硕士学位论文呼吸道感染细菌联合疫苗制备及免疫效果评价作者姓名：张敬学科名称：病原生物学研究方向：细菌感染的预防学习单位：华北理工大学学习时间:3年提交日期:2015年6月19日申请学位类别：理学硕士导师姓名：张庆波教授单位：华北理工大学基础医学院论文评阅人：高俊玲教授单位：华北理工大学基础医学院张志勇教授单位：唐山市工人医院论文答辩日期：2015年5月30日答辩委员会主席：汤华教授关键词：细菌；联合疫苗；细胞免疫；体液免疫；IFN-γ；IL-2唐山华北理工大学2015年6月Preparation

2、andImmunologicEvaluationofCombinedBacteriaVaccineforRespiratoryTractInfectionDissertationSubmittedtoNorthChinaUniversityofScienceandTechnologyinpartialfulfillmentoftherequirementforthedegreeofMasterofSciencebyZhangJing(PathogenicOrganisms)Supervisor:ProfessorZhangQingboJune,2015独创性说明本人郑重声

3、明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得华北理工大学以外其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。论文作者签名：日期：年月日关于论文使用授权的说明本人完全了解华北理工大学有关保留、使用学位论文的规定，即：已获学位的研究生必须按学校规定提交学位论文，学校有权保留、送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以将学位论文的全部或部分内容采用影印、缩印或编入有关数据库进

4、行公开、检索和交流。作者及导师同意论文公开及网上交流的时间：自授予学位之日起；自年月日起。作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要摘要目的研制我国小儿常见呼吸道感染细菌联合疫苗，分别对其进行体外实验与动物体内实验研究。通过检测免疫细胞增殖、细胞因子生成、细胞表型变化、小鼠细胞免疫功能、体液免疫功能、吞噬细胞功能和脏器指数等一系列特异性免疫功能及非特异性免疫功能的免疫学指标，探讨此联合疫苗对机体免疫功能的影响，进一步确定其影响机体免疫系统的机制，为研制我国呼吸道感染细菌联合疫苗提供理论依据。方法1制备联合疫苗分离培养我国小儿呼吸道感染常见6种细菌（溶血性

5、链球菌、流感嗜血杆菌B型、肺炎链球菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、肺炎克雷伯菌），用生理盐水洗细菌三次，然后超声波破碎细菌，用饱和硫酸铵沉淀细菌蛋白，再通过透析膜去除硫酸铵，分光光度计测定蛋白含量，作为抗原。将抗原混合后用生理盐水配置成一定浓度作为联合疫苗。2体外实验1）用CCK-8法检测联合疫苗对人淋巴细胞增殖活性的影响。2）酶联免疫吸附试验（ELISA）测细胞因子白细胞介素-2（IL-2)和干扰素-γ（IFN-γ）含量；3）流式细胞仪(FCM)检测细胞表型变化。3体内实验取SPF级小鼠40只，随机分成四组：正常对照组（NC），联合疫苗1组，联合疫苗2组，联合疫苗3组

6、，每组10只。全部实验小鼠饲喂基础日粮，适应性喂养10天后，分别用浓度为0.1mg∕ml，0.2mg∕ml，0.4mg∕ml联合疫苗免疫1组，2组，3组小鼠，每天上午灌服0.2ml。NC组小鼠每天灌服0.2ml生理盐水。免疫10天。然后将小鼠处死，进行免疫学实验检测。1）测定联合疫苗组小鼠巨噬细胞吞噬功能。2）观察联合疫苗对小鼠细胞免疫功能（迟发型超敏反应，DTH）的影响。3）检测联合疫苗组小鼠血清中溶血素含量的变化。4）观察联合疫苗对小鼠胸腺指数和脾脏指数的影响。结果1人外周血淋巴细胞增殖活性检测结果显示：各浓度联合疫苗组OD值均高于对照组，均对外周血淋巴细胞起增殖作用

7、（P＜0.05），最佳浓度为50µg/ml。2细胞因子IFN-γ、IL-2检测结果显示：各浓度联合疫苗组IFN-γ、IL-2值均高于对照组（P＜0.05，P＜0.01）。最佳浓度为50µg/ml，高于此浓度时，细胞因子含量++开始降低。3流式细胞仪检测CD3细胞和CD19细胞的结果显示：联合疫苗组++CD3细胞数与CD19细胞数均高于对照组（P＜0.01）。4小鼠巨噬细胞吞噬功能检测结果显示：对照组巨噬细胞吞噬率和吞噬指数分别为22.5±1.95和0.32±-I-华北理工大学硕士学位论文0.20；联合疫苗组均显著高于正常对照组