丙泊酚对大鼠肺泡巨噬细胞凋亡及其产生白介素-10和肿瘤坏死因子-α的影响

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1、中图分类号：R392.12；R915硕士学位论文丙泊酚对大鼠肺泡巨噬细胞凋亡及其产生白介素-10和肿瘤坏死因子-α的影响院（系）、所临床医学院研究生姓名钟梓文学科、专业麻醉学导师姓名兰志勋教授二Ο一三年四月目录目丙泊酚对大鼠肺泡巨噬细胞凋亡及其产生白介素-10和肿瘤1坏死因子-α的影响………………………………………11.1中文摘要……………………………………………………11.2英文摘要……………………………………………………41.3前言…………………………………………………………81.4材料与方法………

2、…………………………………………101.5结果…………………………………………………………181.6讨论…………………………………………………………211.7结论…………………………………………………………271.8论文图片……………………………………………………281.9参考文献……………………………………………………391.10英汉缩略词对照表…………………………………………452致谢…………………………………………………………463急性肺损伤时白细胞介素-10在肺泡巨噬细胞中的表达(综述)…………

3、…………………………………………………472泸州医学院硕士研究生毕业论文丙泊酚对大鼠肺泡巨噬细胞凋亡及其产生白介素-10和肿瘤坏死因子-α的影响摘要目的：评价不同浓度丙泊酚对大鼠肺泡巨噬细胞(alveolarmacrophage,AM)凋亡及其产生白介素-10(interleukin-10,IL-10)和肿瘤坏死因子-α(tumor-necrosisfactor-α,TNF-α)的影响。方法：用原位支气管肺泡灌洗法分离大鼠AM，设PBS组、DMSO组、P1组~P6组(丙泊酚的浓度分别为1μM、10μM、

4、25μM、50μM、100μM、300μM)、内毒素(lipopolysaccharide,LPS)-6组(1μg/ml)、地塞米松(dexamethasone,DEX)组(10M)。采用瑞氏-姬姆萨染色法观察AM的形态、MTT法检测AM的活力、Hoechst33258染细胞核、PI染色和annexinV-FITC/PI双染方法测定AM的凋亡率、caspase-3活性检测以及AM吞噬活性的测定来检测丙泊酚对AM凋亡的影响。此外，本研究还通过ELISA法和免疫细胞化学染色法分别测定各组AM分泌IL-10和

5、TNF-α的含量。结果：1.瑞氏-姬姆萨染色显示PBS组和DMSO组的AM呈混合样形态，可见圆形和成纤维状细胞；P1组~P5组AM较PBS组数量明显增多，体积较大，贴壁能力强，折光度好；LPS组AM数量增多更为明显，且呈集中聚集趋势，形似变形虫样改变，体积更大，贴壁能力更强；P6组AM较PBS组数量明显减少，呈浓缩状，贴壁能力弱，折光度差；DEX组AM细胞数量减少更为明显，呈浓缩状，贴壁能力极弱，折光度极差。2.MTT法结果显示：P1组~P5组、DMSO组AM的活力与PBS组相比差异无统计学意义(P>0

6、.05)；P6组和DEX组AM的活力与PBS组1泸州医学院硕士研究生毕业论文相比在24h显著降低(P<0.05)；LPS组AM的活力与PBS组相比从6h开始显著升高(P<0.05)。3.Hoechst33258染色提示PBS组、P1组~P5组、DMSO组和LPS组AM的细胞核呈弥散均匀的蓝色荧光；P6组和DEX组可见AM胞核缩小变形，呈浓染致密的颗粒块状荧光。4.PI结果显示：P6组和DEX组在24h可见明显的凋亡峰，休眠期/DNA合成前期(G0/G1期)细胞数量增多，DNA合成期(S期)和DNA合成后

7、期/分裂期(G2/M期)细胞数量减少；P1组~P5组、DMSO组、LPS组AM的凋亡率与PBS组相比差异无统计学意义(P>0.05)。5.AnnexinV-FITC/PI双染结果显示：P1组~P5组、DMSO组、LPS组AM的凋亡率与PBS组相比差异无统计学意义(P>0.05)；P6组、DEX组AM的凋亡率与PBS组相比显著增高(P<0.01)。6.P6组和DEX组caspase-3的活性显著高于PBS组(P<0.01)；P1组~P5组、DMSO组、LPS组caspase-3的活性与PBS组相比差异无统

8、计学意义(P>0.05)。7.吞噬实验表明：P1组、DMSO组AM的吞噬活性与PBS组相比差异无统计学意义；P3组、P4组、DEX组AM的吞噬活性与PBS组相比显著降低(P<0.01)；LPS组AM的吞噬活性与PBS组相比明显增高(P<0.01)。8.ELISA法和免疫细胞化学染色法结果提示P1组~P6组、DMSO组IL-10和TNF-α的含量与PBS组相比差异均无统计学意义(P>0.05)；DEX组IL-10的含量与PBS组相比明显增加(