人胎肝细胞质膜和人红细胞膜蛋白质组的分析

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1、中国人民解放军军事医学科学院博士学位论文人胎肝细胞质膜和人红细胞膜蛋白质组分析姓名：郭立海申请学位级别：博士专业：生物化学与分子生物学指导教师：贺福初20050520臻昭调对爨衰缩略词对照表4军事医学科学院博士学位论文PBsPhosphatebu仃eredsaline磷酸盐缓冲液PDIpHPMPMSFPVDFQ．TOFMSRBCRPrpmSCXSDSTEMEDTFATrisv-DACPmteindisulncleisomerasePowerofhydmgenPlasmamembmePhenyImelhall-sulfony

2、llnuoridPOly、，inylideneQuadnlp01e-廿me0fflightmassspectrom吼ryRedbloodcellReverseph∞eRo扭IionperminiuteStrongcationexch锄geSodiumdodecylsulf址N，N，N，N’-姒r啪etIlylethyle廿1ylene—di锄ineTrifluoricTrihydro踟ethyl啪inomeIhanev01tage—dependemanion《electivechaIItlel蛋白二硫键异构酶酸碱度细胞质膜

3、苯甲基磺酰氟聚二氟乙烯四级杆时间飞行质谱红细胞反相每分钟转数强阳离子交换十二烷基硫酸钠四氨基乙二胺三氟乙酸三羟甲基氨基甲烷电压依赖性阴离子通道串文攘要摘要细胞质膜构成纲胞对外界环境的屏障和细胞内外环境交流的界面，镶嵌或连接于其中的蛋白质对维持细胞正倦的生理活动具有十分重要的作用，这魃礞鑫霞参与绸藤一缀熬或缨藏一缓黪努藿爱羲谖割、糖辫、连接秘逶诿，信譬懿接受和跨膜传导，细臌内外物质的转运等，影响漪细胞的生长、发育、分化、病变等。细胞质膜蛋自占到已知药物靶标的70％，因此，细臌质膜已经成为广泛静药物{曼诗貔靶稼，缀庭凌簇蛋爨庚

4、缝褥囊学零赛豹毫度囊疆。16．24周孕龄人胎肝处于关键的造血调控和发育分化时期，分析人胎肝细胞质膜蛋白质组有助于对人胎肝的这燎生理活动的认识。我们用麓速离心和密度耱疫离心提取鲢毙了人耱嚣蘩憝获貘，缨魏霞貘毒器恚蘩～5’攀孩营酸臻特器酶活测定照示其富集度达到16倍。用sDs—PAGE-RPLc-EsI-Ms，Ms和“shotguIl”(蛋白三熏裂解一sCX—RPLC．EsI—Q．TOF．MS)两条技术路线，我们从人胎薹于绥魏溪稻躐楚理缨藤簇中鍪定了慧莛532拿≤≥冗余蛋自葳，舅存82令鬣爨group。这是目前已知鼹大的人类组

5、织细胞质膜袭达谱。在人胎肝细胞质膜壤白质表达谱中，已知明确定位于细胞质膜上的蛋白质126个，露艇定蛋白总数的2《。5％。簿貘蛋鑫i筑令，占30．5冁，寒躲虽鑫碡{令。126令缀缒矮骥蛋酝基本覆盖了细胞质膜上所有的功能模块，其中转运体、膜骨架、信号转导、受体、细胞连接、细胞粘附和代谢酶类蛋囱所占比例最凝，分别为18、ls、14、1l、18、9黎6％。这与入籍

6、I手纲魏震貘瓣结构蠢生鬓功筢密弼稳关。另丹，奁入虢肝细胞质膜上鉴定了一魑已报道在细胞质膜上有定位但常见于其它亚细胞结构的蛋白，如细胞质蛋岛Hsp27和HsP70：内质网

7、强自GRP和PDI：线粒体蛋自vDAe，{、珏sP酌帮愆陵合成酶；绸藏棱蛋鑫bsp屯隧》潆秘缝蛋自。送些蛋白质可能参与新的细胞质膜上的缴理活动。鉴于在提取人胎黔细胞质膜时不可避免地存谯其它内膜系统的污染，对于鉴定静菲已知绍藏震袋蛋自，我稻不戆确定是发生寞正酌定鬣变纯覆存在予缨胞质膜述是其它亚细胞结构的污染。正常人红细胞只由胞浆和细胞膜构成，因丽红细臌膜不会有其窀疆细胞结构的污染。所以我们选用正常人红细胞朕住为模式缁魏膜送一步对疑蛋自蒺组遴行分辑。逶遗每磷究入骆辩纲麓蒺貘籀阏静6军事医学辩举院搏圭学垃论文两条技术策略从正常人

8、红细胞膜上鉴定了112个q#冗余蛋白质。其中整合膜餐鑫64个，占总蛋白的s5％，功能来知虽皇16个。这些蛋白质主要集中于骥骨架、转运体、膜运输、斑銎系统(绷胞糖驸)和代谢酶凡静秘能类剐。藉熬化修饰蛋白占攫定蛋白的24％，且88．5％是整合膜溺白。让人感到意外的是在艇定的112个蛋宦质中，r8s超家族蛋白占lO％，戗掺2个fap鬣自，9个fab援自，它们阿能参与红绥稳膜静特殊雏理活动。此外，在红细雅膜主鉴定剜一些其它亚细胞结构的蛋白脯，包括参与氧化还原、月旨类代谢、糖酵解、蛋白运输露蛋自降孵等生理功熊蛋自帮组蛋嶷。出于红缨熬

9、膜不会有其它亚绍胞结梭熙污染，我们认为这些蛋囱质在豇绸藏膜上定位的褥能往非常大。就点得封泉自人胎肝细胞质膜蛋白质组研究的部分支持，提示这些蛋白的细胞质膜定位W能具有普遍爨义。另终，凌蛋白类别上级缨胞膜秘入骀脬具有棱似之处，即溅者的转运体、膜骨架和代谢酶蛋自比铡比较高，缒{妲有特殊之楚，入骀肝缎魏质膜上的