osu03012联合wortmannin对舌鳞癌细胞tca8113增殖活性及ship2蛋白表达的影响

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1、AthesisdissertationsubmittedtoZhengzhouUniversityforthedegreeofMasterEffectofWbrtmanninCombinedwith0SU03012onProliferationofTca8113CellsandSHIP2ProteinExpressiq。VitroressioninitroByJileiLiuSupervisor：Prof．XinguangHanOralandMaxilloficalSurgeryTheFirstAffiliatedHosp

2、italofZhengzhouUniversityApril2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者彩。7兹乙囊争日期：劢7；年f月衫日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作品，知识产权归属郑州大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向

3、国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅；本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：易．7茧乙由日期：加廖年亍月矽日摘要摘要背景：口腔鳞癌是头颈部常见的恶性肿瘤之一，具有增殖速度快、局部侵袭力强的特点。因此研究口腔鳞癌的增殖、转移及早期预测指标对提高患者的治愈率和生存率具有重

4、要的意义。舌鳞癌是口腔鳞癌中最常见的一种类型；舌鳞癌除了具有头颈部恶性肿瘤的特征外，还具有易向颈部淋巴结转移的特点，舌鳞癌的这些生物学特性，是舌癌术后复发的重要因素，严重影响患者的预后，也给口腔颌面部肿瘤的治疗及预防造成很大困难。细胞通过各种转导通路所形成的复杂的网络来传递各种增殖及凋亡信号。其中，P13K／Akt是一个被证实的经典的信号传导通路，在这个信号通路中，磷脂酰肌醇3激酶(phosphatidylinosito．13kinase，P13K)和蛋白激酶B(AKT)是这个信号通路中关键的蛋白分子，AKT的激活通过影响

5、下游多种效应分子的活化状态，在细胞内发挥着抑制凋亡、促进增殖的关键作用，它与人类多种肿瘤的发生发展密切相关。P13K／Akt信号通路在多种人类肿瘤细胞中表达失调，调节着肿瘤细胞的增殖和凋亡，并且与肿瘤的血管形成和侵袭转移也密切相关，因此影响患者的预后，同时也为肿瘤的治疗提供了新的靶点，是目前肿瘤研究的焦点之一。3．磷酸肌醇依赖的激酶．I(PDKl)是Akt的上游关键的活化激酶，它直接影响着AKT的活化程度，从而影响AKT对下游蛋白的调控，包括基因表达调控、细胞周期调控、细胞增殖及分化等。因此，随着其蛋白分子结构及作用机制不

6、断被证实，PDKI在P13K／Akt信号转导通路中的重要性以及对肿瘤的影响越来越受到关注，以信号通路为靶点的治疗在抗肿瘤方面有广阔的应用前景。目的：为了研究P13K／PDKl／Akt信号通路对舌鳞状细胞癌的增殖及相关蛋白表达的影响，本实验选定一定浓度梯度的P13K特异性抑制剂Wortmannin和PDKI的抑制剂OSU03012，以体外培养舌鳞癌细胞株Tca8113为研究对象，来分别阻断以及联合阻断P13K／PDKl／Akt信号通路，来观察对Tca8113细胞增殖抑制的摘要影响，同时检测SHIP2蛋白表达的情况，为舌癌的靶

7、向治疗提供部分理论基础。材料与方法：1．细胞株：人舌鳞状细胞癌细胞系Tca8113由上海交通大学医学院附属第九人民医院口腔颌面外科实验室惠赠2．主要材料：RPMI—1640培养基(含双抗)，胎牛血清(杭州四季青公司)，Wortmannin(渥漫青霉素)购自美国Sigma公司，以DMSO溶解。PDKl抑制剂OSU-03012购自美国selleckchem公司。SHIP2兔抗人多克隆抗体(c．term)(AP8473e)美国ABGENT公司。3．方法：(1)用含10％胎牛血清的RPMll640培养液(含双抗)为培养基，在37。

8、C、5％C02的饱和湿度孵箱中培养舌鳞状细胞癌Tca8113细胞株，每2天换液一次，待细胞生长培养瓶底部约70．80％时，0．25％的胰蛋白酶消化，传代。(2)应用MTT方法检澳1]Wortmannin和OSU．03012单独及联合应用时对舌鳞癌细胞Tca8113增殖活性的影响。(3)应用I汀．PCR，