mptp诱导小鼠帕金森病模型中,clk1参与神经胶质细胞激活及神经毒性的研究

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1、硕士学位论文论文题目MPTP诱导小鼠帕金森病模型中,CLK1参与神经胶质细胞激活及神经毒性的研究研究生姓名张法丽指导教师姓名镇学初专业名称药理专业研究方向神经药理论文提交日期2013年4月1MPTP诱导小鼠帕金森病模型中,CLK1参与神经胶质细胞激活及神经毒性的研究中文摘要中文摘要目的：研究clk1对MPTP诱导的小鼠帕金森病模型中神经元损伤以及胶质细胞激活的影响及其机制。方法：野生型和clk1缺失型C57BL小鼠（Mclk1+/-)采用亚急性帕金森病模型（MPTP，30mg/kg，5天)，利用行为学检测，免疫组化和Westernblo

2、tting方法分别检测MPTP模型后小鼠的行为学改变、脑内多巴胺能神经元损伤及多黑质部位胶质细胞激活情况；体外原代培养星型胶质细胞LPS/IFN-γ刺激，运用Real-timePCR，ELISA，NOassay方法检测星形胶质细胞激活情况，同时采用荧光探针DCFH-DA和JC-1分别检测原代星型胶质细胞内ROS的产生和线粒体膜电位的变化；利用LPS/IFN-γ刺激后的原代星型胶质细胞上清与神经元共培养，观察原代星型胶质细胞对神经元的神经毒性作用；最后利用Westernblotting检测脑组织和体外培养星形胶质细胞内HIF-1α蛋白水平

3、表达的变化。结果：基础条件下，与野生型比较，Mclk1+/-小鼠在行为学表现，多巴胺能神经元损伤，胶质细胞激活状态及胶质细胞线粒体功能方面无明显差异，但是在MPTP模型后，与野生型相比，Mclk1+/-小鼠爬杆时间显著延长，转棒运动时间显著缩短；免疫组织荧光化学检测发现中脑黑质部位TH阳性细胞数量显著减少以及邻近的GFAP和Iba1阳性细胞激活水平显著升高；体外原代培养的Mclk1+/-小鼠星型胶质细胞在LPS/IFN-γ刺激后，TNF-α，NO的释放和ROS生成显著增加；线粒体膜电位检测发现，LPS/IFN-γ刺激后，星型胶质细胞线粒

4、体膜电位显著降低；胶质细胞条件培养基与神经元共培养实验发现，Mclk1+/-小鼠星型胶质细胞对神经元的损伤作用加剧；在炎症环境中，与野生型相比，clk1缺失可明显升高脑内和星形胶质细胞内HIF-1α的表达。结论：1.clk1缺失小鼠对MPTP诱导中脑多巴胺能神经损伤更敏感。2.星型胶质细胞过度激活参与clk1缺失小鼠对MPTP诱导神经元损伤的敏感性。3.clk1缺失对MPTP诱导神经元损伤敏感性的增加和星型胶质细胞对炎症刺激反应性的增加可能与上调缺氧诱导因子HIF-1α有关。关键词：帕金森病；星型胶质细胞；clk1；线粒体作者：张法丽指

5、导老师：镇学初教授I英文摘要MPTP诱导小鼠帕金森病模型中,CLK1参与神经胶质细胞激活及神经毒性的研究Clk1participatesinneuroglialactivationandneurotoxicityinMPTPmousemodelofParkinson'sdiseaseAbstractObject:Investigatetheeffectofclk1geneinMPTPmousemodeltoidentifythefunctionofclk1geneinParkinson'sdisease.Method:Subchroni

6、cMPTPmousemodel(MPTP,30mg/kg,for5consecutivedays)wasemployedinmaleMclk1+/-mutantmiceandwidetypeC57BL/Jmice(WT).Behavioraltestswereperformed7daysafterMPTPinjection,immunologicalhistochemistry(IHC)wascarriedonafterbehavioraltests.PrimaryastrocyteofWTandMclk1+/-mutantwasuse

7、dtoinvestigatetheroleofclk1ininflammatoryresponse.Theexpressionofinflammatorycytokinesandproinflammatoryfactorswereassessedbyreal-timePCR,ELISAandNOassay.Theroleofclk1intheintracellularlevelofreactiveoxygenspecies(ROS)generationandmitochondrialmembranepotentialwerealsoin

8、vestigatedbyusingfluorescentprobeDCFH-DAandJC-1,respectively.Inaddition,MTTassaywereusedtodetecttheneur