6'-羟基爵床素a对hepg2细胞内钙稳态及内质网应激的影响

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2、论文由本人独立撰写，文责自负。新獬绎引叫研究生签名：暂久、￡、年月日～———÷I㈣嬲～目录!_-～!!：一～中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5研究论文6’_羟基爵床素A对HepG2细胞内钙稳态及内质网应激的—LL—j一日U舌⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24附图．．．⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27附表⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯38结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯44参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．45综述内质网应激凋亡通路及通路中耐药节点概述⋯⋯⋯⋯．．50致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯67个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯．．68中文摘要6’．羟基爵床素A对HepG2细胞内钙稳态及内质网应激的影晌摘要研究新型抗肿瘤药物67．羟基爵床素A(6'-hydroxyjusticidinA，JR6)对HepG2细胞的内质网应激及胞内钙离子浓度变化的影

4、响及其作用机制，为研发具有自主产权、低毒性、高效应的肿瘤化合物提供可信具体的实验依据和理论基础。QMTr法检测JR6对HepG2细胞活性的影响。②激光扫描共聚焦显微镜测JR6作用24h后细胞内静息钙浓度变化及IP3R钙泵抑制剂光溜海绵素C干预后JR6的作用变化。@GENMED内质网高质染色试剂盒对不同剂量JR6作用24h后的HepG2细胞进行染色，激光共聚焦显微镜观察染色后不同分组内HepG2细胞内质网形态的变化。④采用蛋白印迹(westernblot)法检测加入受试药24h后HepG2细胞中IREl，GRP78／BiP，Bcl．2蛋白表达量的变化。⑤RT．PCR技术法检测

5、加入受试药24h后HepG2细胞中XBP．1mRNA表达量的变化。⑥蛋白印迹(westernblot)法检测加入受试药24h后HepG2细胞中caspase-3蛋白表达变化(DFCM法检测caspase．3抑制剂Z．DEVD．FMK干预后JR6诱导HepG2细胞凋亡的作用变化。(L)JR6对HepG2细胞活性的影响明显。②加入受试药JR6后，HepG2细胞内钙离子浓度明显增高，IP3R钙泵抑制剂能阻断JR6升高HepG2细胞内钙离子的作用。③加入受试药JR6后，HepG2细胞内质网活动加剧。(至)IREI，Bip，Bcl．2蛋白的表达量与加入JR6剂量负相关。⑤RT—PCR

6、结果显示XBP．1mRNA的表达量随加入JR6剂量的增加而减少。⑥蛋白印迹结果显示caspase．3蛋白表达量与加入JR6的剂量正相关，加入抑制剂Z．DEVD．FMK后caspase．3蛋白几乎无表达。(Z)FCM检测结果显示JR6能明显诱导HepG2凋亡，caspase．3抑制剂Z．DEVD．FMK干预后JR6诱导HepG2细胞凋亡的作用降低。JR6对HepG2细胞具有显著的抑制作用。JR6通过影响Bcl．2蛋白调节内质网钙通道IP3R的开放，引起HepG2细胞内的钙浓度升高，中文摘要破坏细胞内的钙稳态；同时IREl蛋白表达变化标志着JR6引起了内质网应激，启动未折叠蛋白

7、反应的关键因子GRP78／BiP，XBP-1mRNA被JR6抑制，ERS不能通过正常程序被终止。当ERS过长过强时，HepG2细胞趋向凋亡。关键词：HepG2；肿瘤；内质网应激；钙稳态；未折叠蛋白反应英文摘要Effectof6，．hydroxyjusticidinA(JR6)onERSandCa2+inHepG2cellsABSTRACTObjective：Thestudyoftheeffectandmechanismof6'-hydroxy{usticidinA(JR6)onERsandCa+inHepG2cel