低氧对大鼠肺微血管内皮细胞内质网应激性凋亡的影响及intermedin的作用

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1、温州医学院硕士学位论文低氧对大鼠肺微血管内皮细胞内质网应激性凋亡的影响及intermedin的作用姓名：申屠杨萍申请学位级别：硕士专业：内科学指导教师：龚永生；范小芳2012-05-26温州医学院硕士论文低氧对大鼠肺微血管内皮细胞内质网应激性凋亡的影响及intermedin的作用中文摘要目的：研究低氧条件下大鼠肺微血管内皮细胞的凋亡是否与内质网应激途径有关：并探讨新的小分子活性肽intermedin(IMD)对大鼠肺微血管内皮细胞凋亡的影响。方法：用抗体磁珠法分离培养原代大鼠肺微血管内皮细胞，取3,--,5代进行试验。实验分为常氧

2、对照组(N)、低氧实验组(H)、低氧+IMD组(IMD用药组，IMD终浓度为10"7mol／L)，每组设立6个复孔。分别放于相应的培养箱培养48小时，收集上清液和细胞。检测上清液中乳酸脱氢酶(LDH)的含量作为细胞损伤的指标，Hoechst和TUNEL染色检测凋亡，分光光度法检测caSpase一3酶活性，实时定量PCR检测caspase．12、GRP78、GRP94mRNA表达。实验数据用(x士s)表示，并用SPSSl2．0软件进行实验数据的统计学分析，P<0．05有统计学意义。结果：1、LDH检测结果：与常氧对照组相比，低氧实验

3、组的LDH高76．95％(尸

4、．3酶活性高130．77％(P<0．01)：与低氧实验组相比，IMD用药组的caSpaSe一3酶活性低42．22％(P<0．05)。5、Real．timePCR检测显示：与常氧对照组相比，低氧实验组的caSpaSe．12ml斟A表达高42．54％(p<0．05)，GRP78mRNA高60．63％(尸

5、％(火0．05)。结论：1、体外离体培养条件下，低氧引起的大鼠肺微血管内皮细胞凋亡与内质————————————————————j璺些堕堡主堕窒网应激途径有关。2、IntenIledin有抑制低氧条件下体外培养的大鼠肺微血管内皮细胞凋亡的作用，但内质网应激途径可能不是主要的通路。关键词：低氧；内皮细胞；内质网；凋亡；intenIledin温州医学院硕士论文ApoptosisAssociatedwithEndoplasmicReticulumStressofPulmonaryMicrovascularEndothelialCells

6、inHypoxicConditionsandtheEffectofIntermedinAbstractObjective：1．Toinvestigateapoptosisassociatedwithendoplasmicreticulumstressofpulmonarymicrovascularendothelialcellsinhypoxieconditions．2．Toinvestigatetheeffectofintermedinonthereticulumstress—associatedapoptosisofpulmo

7、narymicrovascularendothelialcells．Methods：Themethodofantibodymagneticbeadswasusedtoseparatethegenerationofpulmonarymicrovascularendothelialcellsonrat．The3-5generationsoftheratmicrovascularendothelialcellsweretakenforthetest．Wesetnormaloxygencontrolgroup，hypoxiagroupan

8、dhypoxiaintermedin(IMD)group．EachWasputinthecorrespondingincubator．Afterculturedfor48hours，cellsandupperliquidwerecollected．