内质网应激对慢性间歇性低氧幼鼠记忆损害的影响

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1、温州医学院硕士学位论文内质网应激对慢性间歇性低氧幼鼠记忆损害的影响姓名：李秀翠申请学位级别：硕士专业：儿科学指导教师：蔡晓红2012-05-26温州医学院硕士学位论文二、论文摘要内质网应激对慢性间歇性低氧幼鼠记忆损害的影响(中文摘要)目的：儿童阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征(Obstructivesleepapneahypopneasyndrome，OSAHS)神经系统并发症的主要临床表现为认知功能障碍，近年来在国内外逐渐受到关注，具体机制尚未阐明。内质网应激导致的细胞凋亡在中枢神经系统各种疾病中有重要作用

2、，但与OSAHS神经系统病变关系的研究少见。本实验主要通过研究间歇性低氧幼鼠认知功能改变，观察海马的神经元凋亡，测定内质网应激标志物(BiP、ATF4、)(BP—l、CHOP和p-PERK)的表达水平，探讨内质网应激对慢性间歇低氧幼鼠记忆损害的机制，为儿童OSAHS认知功能障碍发生发展机制的研究及治疗提供实验基础和理论依据。方法：将SPF级雄性Sprague--Dawley(SD)幼鼠随机分为lO组：慢性间歇低氧2周和4周模型组(21H和4IH)、空气模拟对照2周和4周组(2AC和4AC)、空气对照2周和4

3、周组(2C和4C)，2IH、2C组分别为13只，其余组每组8只。模型组幼鼠放入间歇低氧舱内，使舱内低氧时氧浓度在8．5％～21．5％内变化，90s一次循环，每天7．5小时，每周7天；空气模拟对照组输入气体为压缩空气，其他条件与前者相同。2C、21H组随机各取5只幼鼠颈动脉置管后，分别放入间歇低氧舱、室内空气中2h后，抽取颈动脉血，经血气分析验证动物模型。造模结束前10天开始八臂迷宫训练，造模结束当日行八臂迷宫测试，记录工作记忆错误(wME)、参考记忆错误(RME)和总错误次数(TE)。测试结束，每组随机取6

4、只幼鼠将其麻醉后取腹主动脉血测SOD活力，然后立即处死，断头分离海马，real—timePCR法测海马免疫球蛋白结合蛋白(BiP)、转录激活因子4(ATF4)、X结合蛋白1(XBP—1)、C／EBP同源蛋白(CHOP)mRNA基因表达，westernblot法检测海马磷酸化的RNA激活蛋白激酶的内质网类似激酶(p-PERK)、CHOP的蛋白表达；每组剩余2只大鼠多聚甲醛灌注后分离海马后制作石蜡标本，HE染色、TUNEL法检测海马神经元病理学改变，免疫组化法检测p-PERK、CHOP的蛋白定性表达。温州医学院

5、硕士学位论文结果：(1)模型验证：经动脉血气分析，在一个低氧一复氧周期内，模型组P0。、SaO。出现明显的波动，最低PO。、SaO。分别为(44+3)mmHg、(75±3)％。(2)SOD活力的测定：2IH、4IH模型组幼鼠血清、海马SOD活力低于相应对照组(P均0．05)。(3)认知行为学检测：各组RME、WME、TE均随训练目的递增而减少(pG0．05)；第5-7天起，不同组在同一训练日的RME、

6、WME、TE均有显著差异(pG0．05)；八臂迷宫测试2IH组RME、WME、TE高于2C组，4IH组高于4C组，4IH较2IH组明显增加(P均GO．01)，空气模拟对照组与对照组比较无明显差异(P)O．05)。(4)形态学观察：光镜下，2IH和4IH组幼鼠海马CAl区变性神经元增多，且损伤范围和程度以4IH组最重(P均

7、测海马BiP、ATF4、CHOP、XBP一1mRNA的表达：与相应对照组比较，IH组幼鼠海马BiP、ATF4和CHOPmRNA表达均增加(PGO．05)，XBP一1mRNA无明显差异(P>O．05)；与2IH组比较，4IH组ATF4、CHOPmRNA表达显著升高(P<0．01)，BiPmRNA表达未见明显差异(P>0．05)；空气模拟对照组与对照组比较无明显差异(P>0．05)。(6)从定性到半定量论证蛋白表达：①免疫组化法检测海马p-PERK、CHOP的表达：p-PERK、CHOP阳性细胞分别在胞核和核膜

8、周围、胞核和胞浆表达。与2C组比较，2IH组p-PERK表达增加，4IH组更明显(p<0．05)；2IH组CHOP表达增加，4IH更明显(pGO．05)；空气模拟对照组与对照组比较无明显差异(P>O．05)，4周组组间变化与2周组一致。②Westernblot法检测海马和皮层p-PERK、CHOP的表达：与相应对照组比较，2IH、4IH组p-PERK、CHOP蛋白表达上调；与2IH组比较，4IH组p-PERK、C