toll样受体(tlr)2、tlr4和tlr5在华支睾吸虫感染小鼠中初步的研究

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1、徐州医学院硕士学位论文Toll样受体(TLR)2、TLR4和TLR5在华支睾吸虫感染小鼠中的初步研究中文摘要目的本研究拟应用华支睾吸虫感染C3H／HeN小鼠动物模型，取感染小鼠肝脏组织检测Toll样受体(TLR)2、TLR4和TLR5动态表达情况，初步探讨其在华支睾吸虫病免疫应答机制中的作用。方法(1)建立华支睾吸虫感染C3H／HeN小鼠模型：自流行区采集感染华支睾吸虫囊蚴的麦穗鱼，常规分离囊蚴。选用健康雌性C3H／HeN小鼠，按每只小鼠35个华支睾吸虫囊蚴经口灌入小鼠胃内，再用适量生理盐水冲洗，以保证囊蚴的饲入。分别于感染第0d、1d、7d、14d

2、、28d、56d、84d颈椎脱位处死小鼠3只，无菌低温操作取肝脏左外叶组织，以肝门为界分为上下两部分，上部分组织50．100mg装入含有lmlRNAStore冻存管中，4。C过夜后转移至一20。C冰箱保存，用于抽提总RNA；下部分组织用4％多聚甲醛固定24h，常规法石蜡包埋、切片、HE染色后观察感染各期小鼠肝脏病理变化。感染小鼠于感染后20d始收集粪便，以NaOH消化法检查虫卵。(2)采用半定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测感染各期小鼠肝脏组织TLI也、TLR4、TLR5mRNA的表达水平变化。结果(1)华支睾吸虫感染C3H／HeN小鼠虫卵检

3、出率为44．4％。(2)病理学观察：感染第0dtJ,鼠肝脏，肝细胞排列整齐，肝小叶结构完整，汇管区无纤维结缔组织增生，无炎性细胞浸润，胆管无扩张和增生。感染第ldtJ,鼠肝脏，光镜下未见肝脏结构异常。感染第7dd'鼠肝脏，见肝脏有坏死灶，炎症细胞浸润，胆管上皮反应性增生，周围有少量纤维增生。感染第14d／J、鼠肝脏，汇管区大量炎症细胞浸润，胆管上皮反应性增生，局部有少量的纤维增生，部分肝脏细胞发生变性，呈现肝脏急性炎症性病变。感染第28dd、鼠肝脏，肝细胞排列紊乱，汇管区周围大量炎症细胞浸润伴有纤维组织增生，汇管区胆管显著扩张且上皮细胞呈乳头状增徐州

4、医学院硕士学位论文生。感染第56dd',鼠肝脏，肝细胞排列紊乱，汇管区出现大量纤维组织增生伴有炎症细胞浸润，肝细胞水肿变性甚至出现溶解坏死，部分胆管上皮细胞溶解变性。感染第84dd',鼠肝脏，肝细胞坏死严重，大量纤维组织增生，肝脏出现纤维硬化，许多视野下无正常的肝脏结构存在。(3)感染小鼠各时间点肝脏组织TLR2、TLR4、TLR5mRNA均表达。各时间点(第1d、7d、14d、28d、56d、84d)与感染第0d相比，TLR2mRNA相对表达量，自感染后第1d升高，7d再升高俨<0．05)，14d下降，28d升高达高峰(尸<0．01)，56d迅速下

5、降到第0d水平，84d维持在第0d水平；TLR4mRNA相对表达量与第0d相比，自感染后第1d升高(P<0．05)，7d与1d持甲妒<0．05)，14d下降，28d升高达高峰(P<0．01)，56d迅速下降到接近第0d水平，84d维持在接近第0d水平；TLR5mRNA相对表达量与第Od相比，自感染后第1d升高达高峰(P<0．01)，7d与第1d持平处于表达高峰水平(P<0．01)，14d下降，28d升高(尸

6、(2)TLR2、4、5参与华支睾吸虫感染免疫应答过程，在感染急性期主要协同调控Thl型免疫应答。关键词华支睾吸虫；Toll样受体；肝脏病变；RT-PCRTheinitialstudyofTLR2(Toll—likereceptor)，TLR4andTLR5inC3H／HeNmiceinfectedwithClonorchissinensisAbstractOhjectiveThisresearchusesC3H／HeNmiceinfectedwithClonorchissinensis，andobservesthedynamicexpressiono

7、fTLR2，TLR4andTLR5inlivertissuediscussingtheirrolesincausingpathogenicmechanismofClonorchiasissinensis·Methodsf1establishmentofC3H／HeNmiceinfectedwithClonorchissinensismodel：CollectedwheatfishinfectedmetacercariaofClonorchissinensisfromendemicareasandconventionalseparationofmeta

8、cercariae．HealthyfemaleC3HflteNmicewereselectedasexper