toll样受体(tlr)2、tlr3、tlr4和tlr9在华支睾吸虫感染小鼠肝脏中动态表达初步的研究

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1、●徐州医学院硕士学位论文缩略词APCDCESATh缩略词表Abbreviation英文全称AntigenpresentingcellDendriticeellExcretory-secretoryantigen中文全称抗原提呈细胞树突状细胞排泄．分泌抗原HelperTlymphocyte辅助T细胞H．E染色HematoxylinandEosinStaining苏木素-伊红染色IRF3IFNILLPSImerferonInterlukineLipopolysaccharidesIFN调节因子3干扰素白细胞介素脂多糖MyD88

2、Myeloiddifferentiationfactor88髓样分化因子88NF．1cBNuclearfactorkappa-light-chain-enhancerof细胞核Kappa轻链PAMPsPathogen—associatedmoleculepaRemsPBSPhosohate．bufferedsalinepolyI：CPolyinosinic—polycytidylicacidSEATLR田NFSolubleeggantigensToll-likereceptorTumornecrosisfactor病原相关

3、分子模式磷酸盐缓冲液聚肌苷酸胞嘧啶核苷可溶性虫卵抗原Toll样受体肿瘤坏死因子㈣钌哪0M5㈣踮脚1脚丫徐州医学院硕士学位论文Toll样受体(TLR)2、TLR3、TLR4和TLR9在华支睾吸虫感染小鼠肝脏中动态表达的初步研究中文摘要目的本研究拟应用华支睾吸虫感染小鼠动物模型，观察Toll样受体(TLR)2、TLR3、TLR4和TLR9在肝脏组织中的动态表达，为探讨其在华支睾吸虫免疫致病机制中的作用提供依据。方法1．建立华支睾吸虫感染小鼠模型：参考本实验室前期实验研究，实验动物选用健康雌性Balb／c小鼠64只，随机取40只

4、作感染组，24只作正常组。其中，感染组小鼠按35个／只华支睾吸虫囊蚴经口灌入小鼠胃内，再用适量生理盐水冲洗，以保证囊蚴的饲入。正常组小鼠只给予生理盐水灌胃。2．分别于感染后第1d、2d、4d、7d、14d、28d、56d、84d颈椎脱位处死感染组小鼠5只，正常组小鼠3只。无菌低温操作取肝脏左外叶组织，以肝门为界分为上下两部分，上部分肝组织置冻存管中放入液氮保存，用于抽提总RNA；下部分肝组织用4％多聚甲醛固定48h，常规法石蜡包埋、切片、HE染色后观察感染各期小鼠肝脏病理变化。3．采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测

5、感染各期小鼠肝脏组织TLR2、TLR3、TLR4、TLR9mRNA表达水平。结果1．病理学观察：感染后第1d，童虫寄生大胆管周围有炎症反应；第2d，汇管区轻度炎症反应；第4d，肝细胞有水样变性；第7d，汇管区炎症反应加重；第14d，汇管区可见嗜酸性脓肿、纤维组织增生、炎性细胞浸润；第28d，小胆管增生趋于明显，胆管周围纤维组织增生和炎性渗出明显，肝细胞呈片状坏死；第56d，胆管上皮有不同程度的增生、增生的上皮呈腺样结构：第84d，胆管周围炎性细胞减少、纤维增多、管壁增厚。2．正常组和感染组各时间点肝脏组织TLR2、TLR3

6、、TLR4、TLR9mRNA均表达。与正常组相比，感染组TLR2、TLR4mRNA表达量自感染后第7d起开始升高(P<0．05)，至第28d达到高峰后开始下降，至第2徐州医学院硕士学位论文56d仍高于正常组(尸<0．05)，直至第84d下降至与正常组相近水平：TLR3、TLR9mRNA在各个时相的表达无显著差异(胗0．05)。结论1．华支睾吸虫感染小鼠肝内胆管病变由早期大量炎性细胞浸润转变为后期纤维化增生。2．TLR2、TLR4可能诱导了华支睾吸虫感染小鼠感染早期肝脏炎性病理改变。关键词华支睾吸虫；肝脏；Toll样受体；R

7、T-PCR徐州医学院硕士学位论文AninitialstudyofdynamicexpressionofTLRs2，3，4，9inliver』●●●■●1●-J一-·‘●0ImlCelnlectedwith(．IonorchissinenstsAbstractobjeetiveInamousemodelofclonorchiasissinensis，thedynamicexpressionofTLRs2，3，4，9innormalandparasiteinfectedliverswasinvestigatedtoprovid

8、ebasisfortheirrolesinthepathogenicmechanismofclonorchiasissinensis．Methods1．AwellcharacterizedmousemodelofclonorchiasissinensisWasusedinthisstudy．64heal