microrna-1246调控b细胞活化及其在系统性红斑狼疮发病中的作用

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1、分类号UDCR7引学校代码f秒占弓弓密级公开博士学位论文MicroRNA．1246调控B细胞活化及其在系统性红斑狼疮发病中的作用TheRoleofMicroRNA一1246intheRegulationofBcellactivationandthePathogenesisofSystemicLupusErythematosus作者姓名：罗双艳学科专业：临床医学研究方向：皮肤病与性病学院、系(所)：湘雅二医院指导老师：陆前进教授论文答辩日期趁!圣：互：圣卑答辩委员会主席中南大学二O一三年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论

2、文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者虢罩垫隰丝年三月4日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学

3、位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：聊签名竖嗍丝年三月耸日本课题资助基金国家重点基础研究发展计划(973计划)(2009CB825605)国家自然科学基金重点项目(30730083)国家自然科学基金重大国际合作项目(81220108017)国家自然科学基金面上项目(30972745)II摘要MicroRNA．1246调控B细胞活化及其在系统性红斑狼疮发病中的作用系统性红斑狼疮(SystemicLupusErythematosus，S

4、LE)是一种累及多器官、多系统，严重危害人类健康的自身免疫性疾病。其主要发病机制为B细胞过度活化产生大量自身抗体，与自身抗原形成免疫复合物，沉积于多器官，造成其炎症反应和组织损伤。SLE的发病与多种因素有关，如遗传、性激素、吸烟、感染、药物等环境因素，其确切的发病机制不清。近年来的研究表明，表观遗传机制异常在SLE的发生、发展中起着重要作用。MicroRNAs(miRNAs)为表观遗传调控重要机制之一。miRNAs是非编码RNA分子中最大的一个亚型，长度约19．25个核苷酸。miRNA可通过与靶mRNA的3’端非翻译区、编

5、码区或5’端非翻译区结合形成RNA诱导的沉默复合体，抑制翻译或引发mRNA降解，从而调控蛋白编码基因的转录后翻译(R_ISC)[1—3]。最近研究表明，miRNA通过转录后基因沉默调控至少60％的人类蛋白编码基因[4]。miRNA在调节和促进免疫系统发育中起重要作用[5】，可以作为多种疾病诊断的生物学标志物或治疗靶点[6]。目前已有很多关于研究IIImiRNA的报道，如miR-15517]、miR-32618]、miR-23b[9]、miR．126[10]、miR-142—3p／5p[11]、miR-146a[5]、miR

6、-182[12]、miR-150[13]和miR．124[14]等通过影响T、B细胞的功能，进而导致自身免疫性疾病的发生。在人类多种自身免疫性疾病如系统性红斑狼疮、多发性硬化症、自身免疫性糖尿病和类风湿关节炎，已经发现多种miRNA的异常表达。然而，miRNA在SLE的发病机制中的具体作用还需要进一步研究。目前miR-1246只在人类和猿类基因组中被发现，在人类其编码基因位于染色体2q31．1上，近期有研究报道miR-1246异常表达与P53调控有关，从而参与唐氏综合征及肿瘤的发病机理[10，15，16]。也有研究报道称血

7、清学检测miR-1246可作为食管鳞状细胞癌诊断及预后的生物学指标[17]。然而关于miR-1246在自身免疫疾病中的发病机制尚未有任何研究报道。本课题前期通过miRNA芯片技术研究比较11例SLE患者与11健康对照者B细胞miRNA表达谱的差异，发现与健康对照组相比，miR-1246在SLE患者B细胞中表达降低。将样本量扩大后进行real．timePCR验证了miR．1246在SLE患者B细胞中表达下调。同时我们也证实了miR．1246低表达与Akt异常活化抑制P53表达有关。而且我们证实了EBFl是miR-1246靶基

8、因。用miR-1246抑制剂处理健康对照组B细胞后，发现EBFl表达明显上IV调，B细胞过度活化，产生抗体增多。相反，过度表达miR-1246导致SLE患者B细胞中EBFl的表达水平下调，B细胞活性降低，抗体产生减少。同时我们还发现miR．1246通过调控EBFl的表达，使BCR信号通路AKT磷酸化水平