microrna-2010对cd4+t细胞活化的调控及其在寻常型银屑病发病中的作用

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1、中图分类号UDCR75610硕士学位论文学校代码j05靼密级公珏Micro砌姐一210对cD4+T细胞活化的调控及其在寻常型银屑病发病中的作用TheR0leofMicroRNA一210intheRegulationofTceIlactiVationandthePathogenesisofpsoriasisVulgaris作者姓名：王利涛学科专业：临床医学研究方向：皮肤病与性病学学院(系、所)：指导老师：副指导老师：湘雅二医院苏玉文教授赵明副教授论文答辩日期勉旦至蝴呈悃答辩委员会主席中南大学二。一三年五月原创

2、性声明洲Ⅲ⋯Ⅲ0川

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5、II《圳㈣Y2423346本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。日期：型!三年上月生日学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，

6、允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。型璺年土月丑日本课题资助基金湖南省科技计划一般项目(2010FJ6032、2011FJ3254)湖南省自然科学基金资助项目(07JJ3048)国家重点基础研究发展计划(973计划)(2009CB825605)IIMicroRNA一210对CD4+T细胞活化的调控及其在寻常型银屑病发病中的作用摘要

7、：目的：寻常型银屑病是一种常见的慢性复发性炎症性皮肤病，以鳞屑性红斑为特征，因影响外观，给患者造成严重的心理负担。寻常型银屑病的病因及发病机制尚不明确，目前研究认为T细胞介导的免疫反应，特别是Thl细胞介导的自身免疫反应及调节性T细胞免疫抑制功能缺陷，在寻常型银屑病发病中起重要作用。越来越多的研究表明microRNAs通过调控相应靶基因的表达在CD4+T细胞的异常活化中起着十分重要的作用。我们课题组之前利用A厨metrixmicroRNA基因j签片技术比较了9例寻常型银屑病患者及9例健康对照外周血单个核细胞

8、(PBMCs)中microRNAs表达水平的差异并通过RT-PCR进行验证，发现microRNA．210(miR．210)在寻常型银屑病患者PBMCs中表达明显升高。本课题进一步探索了miR一210在寻常型银屑病免疫失调中的作用及机制，为揭示该病的发病机制提供新的思路。方法：收集18例寻常型银屑病病人及18例正常对照的健康人外周血，利用密度梯度离心法分离PBMCs，免疫磁珠法分离CD4+T细胞。利用实时荧光定量PCR(realtimePCR)检测miR．2lo表达水平；利用Mirbase／Targetsca

9、ns／PicTar等生物信息学软件在线预测miR-210的潜在靶基因；选择可能与寻常型银屑病发病相关的靶基因，进而利用荧光素酶报告基因系统验证两者之问的调控关系；利用realtimePCR检测CD4+T细胞中miR．210潜在靶基因mRNA的表达水平，同时利用w色stemblot检测其蛋白水平；利用T淋巴细胞转染试剂盒将miR_210mimic或inhibitor及其阴性对照分别转染正常人及寻常型银屑病病人CD4+T细胞；利用酶联免疫吸附法(ELISA)检测细胞培养上清中细胞因子水平。结果：与正常对照相比，

10、miR-210在寻常型银屑病人CD4+T细胞中表达水平明显升高；Mirbase厂rargetscans／PicTar等生物信息学软件预测显示转录因子FOⅫ3是miR-210的潜在靶基因之一，荧光素酶报告基因系统证实F0Ⅻ3为miR-210的靶基因；在寻常型银屑病人CD4+T细胞中FOⅫ3表达水平明显降低，与miR-210的表达水平呈显著负相关。在正常人CD4+T细胞中过表达miR一210时，与对照组相比，FOXP3蛋白表达水平明显下降，同时细胞因子IL．10、TGF．p表达水平亦明显降低，而IFN一丫表达水

11、平明显升高；相反，在寻常型银屑病外周血CD4+T细胞中的特异性抑制miR．210表达时，FOXP3蛋白表达水平明显升高，同时细胞因子IL．10、TGF—p表达水平亦明显升高，而IFN一1，表达水平明显降低。结论：miR_210在寻常型银屑病CD4+T细胞中过度表达，并通过抑制其靶基因FOXP3表达，导致CD4+T细胞的异常活化，炎性因子分泌增加，进而参与银屑病的发生、发展。图24个，表20个，参考文献45篇。关键