microrna-142-3p5p对cd4+t细胞活化的调控及其在系统性红斑狼疮发病中的作用

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1、分类号VDC博士学位论文MicroRNA--142--3p／5p密级对CD4+T细胞活化的调控及其在系统性红斑狼疮发病中的作用TheRoleofMicroRNA-—142—·3p／5pintheRegulationofTcellactivationandthePathogenesisofSyst"LutErythematoslSystemicupusthematosus作者姓名：丁澍学科专业：皮肤病与性病学院、系(所)：湘雅二医院指导老师：陆前进教授论文答辩日期函以工·衫’答辩委员会主席丝之垒中南大学二。一二

2、年五月原创性声明本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。作者签名：学位论文版权使用授权书本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留学位论文并根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文，允许学位论文被查阅和借阅；学校可以公布学位论文的全部或部分

3、内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文。同时授权中国科学技术信息研究所将本学位论文收录到《中国学位论文全文数据库》，并通过网络向社会公众提供信息服务。作者签名：盟导师签名竖皇兰●日期：旦年』月』日本课题资助基金国家重点基础研究发展计划(973计划)(2009CB825605)国家自然科学基金重点项目(30730083)国家自然科学基金面上项目(30972745)博士学位论文中文摘要摘要系统性红斑狼疮(SystemicLupusErythematosus，SLE)是一种严重危害人类健康的自身免疫性疾病。

4、其特点是T细胞过度激活，过度辅助自身B细胞产生大量的自身抗体，造成体内多器官的炎症反应和组织损伤。目前虽然导致SLE的发生、发展的分子机制尚未明确，但近年来的研究表明，除了遗传因素外，表观遗传机制在SLE的发病机制中起着重要作用。MicroRNAs(miRNAs)为表观遗传调控机制之一。miRNAs是一类长度约21．25个核苷酸的内源性非编码RNA分子，被认为是细胞生命活动中相关基因的潜在负调节子。miRNA可通过与靶mRNA的3’端非翻译区、编码区或5’端非翻译区结合进而抑制翻译或引发mRNA降解，阻遏基因

5、转录后的翻译过程。miRNA是生物体自身的一套正常的调控机制，直接调节哺乳动物的基因组中30％以上蛋白编码基因的转录。最近的研究表明，miRNA参与调节人体各种免疫过程，可以作为多种疾病诊断的生物学标志物或治疗靶点。在人类多种自身免疫性疾病，包括红斑性狼疮、类风湿关节炎和多发性硬化症中已经发现多种miRNA的表达改变。然而，miRNA在SLE的发病机制中的作用还需要进一步研究。miR．142被认为是T细胞特异性miRNA，在调节T细胞的发育中起着重要的作用。miR-142前体可以产生两个成熟miRNA，从前体

6、5’端的臂加工而来的命名为miR．142．5p，从前体3’端的臂加工而来的命名为miR-142．3p。本课题之前的miRNA芯片研究发现，与博士学位论文中文摘要健康对照组相比，miR-142．3p和miR-142．5p在SLE患者CD4+T细胞中表达降低。我们通过扩大样本量进行real．timePCR验证了miR-142．3p和miR-142．5p在SLECD4+T细胞表达下调。另外，我们证实了CD84是miR．142．3p的靶基因，而SAP为miR-142．5p的靶基因。用miR-142．3p／-5p抑制剂

7、处理健康对照组CD4+T细胞，导致CD84和SAP表达上调。此外，抑制CD4+T细胞miR-142．3p／5p表达使T细胞过度活化，并促使B细胞产生抗体增多。相反，过度表达miR-142．3p／．5p，导致SLE患者CD4+T细胞中CD84和SAP的表达水平下调，T细胞活性降低，抗体产生减少。此外，我们还发现miR-142前体序列上游500bp内的组蛋白修饰和DNA甲基化可能调节miR-142-3p／5p的表达。通过这些研究揭示了miR-142—3p／5p低表达可能是导致SLECD4+T细胞自身反应的重要分子

8、机制，为寻找治疗SLE有效的新靶点提供了理论依据。第一部分SLE患者CD4+T细胞miR．142．3p／5p及其靶基因表达第一节SLE患者CD4+T细胞miR-142．3p／5p表达目的：检测SLE患者CD4+T细胞miR-142．3p／5p表达改变方法：1．密度梯度离心分离正常人、SLE患者的外周血单个核细胞，磁珠分离CD4+T细胞；2．试剂盒提取miRNA；II博士学位论文中文摘要3．逆转录合成