DNA甲基化在三疣梭子蟹性腺、胚胎和幼体发育调控中的作用研究

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1、学校代码：10264研究生学号：M150107148上海海洋大学硕士学位论文DNA甲基化在三疣梭子蟹性腺、胚胎和幼体发育调题目：控中的作用研究TheRoleofDNAMethylationintheDevelopmental英文题目：RegulationofGonads,EmbryosandLarvaeoftheswimmingcrabPortunustrituberculatus专业：动物遗传育种与繁殖研究方向：三疣梭子蟹遗传育种姓名：蔡影指导教师：刘萍研究员二O一八年三月二十日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在

2、导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年解密后适用本版权书

3、。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注战文斌中国海洋大学教授主席宋协法中国海洋大学教授委员王芳中国海洋大学教授委员王清印黄海水产研究所研究员委员李玉全青岛农业大学教授委员翟倩倩黄海水产研究所助理研究员秘书答辩地点黄海所1号楼3楼会议室答辩日期2018.05.19上海海洋大学硕士学位论文DNA甲基化在三疣梭子蟹性腺、胚胎和幼体发育调控中的作用研究摘要三疣梭子蟹（Portunustrituberculatus）是我国沿海地区重要的海水养殖经济蟹类之一，在我国海洋捕捞对象中占据重要的地位

4、。当前，三疣梭子蟹人工养殖规模在逐渐扩大，但在规模化养殖过程中出现了三疣梭子蟹性腺发育不良、个体偏小等问题，优质的三疣梭子蟹产量不能满足人们的需求。近年来，人们越来越重视三疣梭子蟹繁殖发育调控机制的相关研究，而性腺是繁殖发育的重要器官，承担着繁殖后代的重任，有众多调节因子参与了配子发生过程的调控。DNA甲基化修饰作为表观遗传重要组成部分之一，在真核生物生长发育中有重要的功能。本实验将从DNA甲基化角度初步研究DNA甲基化对三疣梭子蟹性腺、胚胎和幼体发育的调控机制，为深入研究三疣梭子蟹繁殖发育提供参考。主要研究结果如下：1.三疣梭子蟹性腺、胚胎和幼体DNA甲基化水平分析为了更直观的

5、了解DNA甲基化在三疣梭子蟹发育中的作用，我们采用Methylflash方法分析了三疣梭子蟹性腺、胚胎和幼体发育不同时期的DNA甲基化水平。结果显示，卵巢发育不同时期DNA甲基化的水平大约0.005％-0.07％，DNA甲基化在卵巢发育不同时期都存在。其中，VI期卵巢的DNA甲基化水平最高，V期甲基化水平次之，显著高于卵巢发育其它时期（P＜0.05）。胚胎发育时期，胚胎DNA甲基化的水平在0.008％-0.08％，DNA甲基化的水平呈现先下降后上升的趋势，在受精卵和无节幼体时期的DNA甲基化的水平最高，在囊胚期甲基化的最低。而在幼体发育阶段，DNA甲基化的水平呈现先下降后上升的趋

6、势，在蚤状幼体I期的甲基化水平最高（P＜0.05）。结果表明，DNA甲基化在性腺、胚胎和幼体发育中有重要的作用。2.三疣梭子蟹甲基化基因Dnmt2，Dnmt3b，UHRF1，MBD2，MBD4克隆及其在性腺、胚胎和幼体发育不同时期的表达分析为了研究DNA甲基化相关基因Dnmt2、Dnmt3b、UHRF1、MBD2和MBD4在三疣梭子蟹性腺、胚胎和幼体发育中的作用。本实验利用RACE技术克隆了上I上海海洋大学硕士学位论文述5个基因的cDNA全长，同时利用GeneTool，MEGA等软件进行了序列分析，同源性分析和进化树分析，结果显示：上述5个基因在进化上相对保守，与其它物种的同源性

7、在55％-60％。其中三疣梭子蟹Dnmt2氨基酸序列和罗氏沼虾中的Dnmt2进化关系最近，Dnmt3b和UHRF1氨基酸序列同中华蜜蜂和桃蚜的进化关系最近，而MBD2和MBD4氨基酸序列则和端足虫进化关系最近。三疣梭子蟹各组织表达分析结果显示，5个基因在肝胰腺、性腺、胸腺、鳃、脑神经节、肠道、肌肉等组织中均有表达。Dnmt2，Dnmt3b和MBD4在卵巢中的表达量显著高于其它组织的表达（P<0.05）。对三疣梭子蟹甲基化基因Dnmt2，Dnmt3b，UHRF1，MBD2，MBD4