aβl-40诱导的神经干细胞凋亡中钾通道和jnk信号转导通路的变化

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1、单位代码：10222学号：10873021分类号：佳木斯大学临床医学硕士专业学位论文论文题目：Aβl-40诱导的神经干细胞凋亡中钾通道和JNK信号转导通路的变化研究生姓名：田嘉莹学科、专业：神经病学导师姓名、职称：盛宝英教授论文答辩日期：2013年06月15日佳木斯大学临床医学硕士专业学位论文论文题目：Aβl-40诱导的神经干细胞凋亡中钾通道和JNK信号转导通路的变化研究生：田嘉莹专业：神经病学指导教师：盛宝英单位：佳木斯大学附属第一医院协助指导教师：齐志国单位：佳木斯大学附属第一医院学习期限：2010年9月至2013年6月学位授予单位：佳木斯大

2、学学术诚信承诺本人郑重声明：所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，也不包含为获得佳木斯大学或其他教育机构的学位或证书所使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中做了明确的说明并表示了谢意。签名：___________日期：____________关于论文使用授权的说明本人完全了解佳木斯大学有关保留、使用学位论文的规定，即：学校有权保留送交论文的复印件，允许论文被查阅和借阅；学校可以公布论文的全部或部分内容，可以

3、采用影印、缩印或其他复制手段保存论文。（保密的论文在解密后应遵循此规定）签名：___________导师签名：___________日期：____________目录一、中文摘要1二、英文摘要4三、前言7四、文献综述9五、材料与方法15六、结果24七、讨论30八、结论33九、参考文献34十、致谢38十一、英文缩写39十二、攻读学位期间发表的论文40十三、附图41佳木斯大学临床医学专业硕士学位论文摘要目的：探讨钾通道在Aβl-40诱导的神经干细胞凋亡过程中发挥的作用；探讨JNK信号转导通路在Aβl-40诱导的神经干细胞凋亡中的作用；以及钾通道与JN

4、K的关系。进一步了解阿尔茨海默病(Alzheimer’sdisease,AD)的发病机制，从而为开发治疗AD药物提供新的思路和方法。方法：1.分离提取新生的Wistar大鼠海马区的神经干细胞并传代培养，应用Nestin细胞免疫化学法鉴定。2.应用MTT法检测TEA干预Aβ1-40诱导后的神经干细胞存活率的变化。3.应用Hoechst33342染色法在荧光显微镜紫外激发下观察神经干细胞凋亡的形态学变化。4.应用比色法检测TEA对Aβ1-40诱导的神经干细胞Caspase-3活性的变化。5.应用Westernblot法检测Aβ1-40诱导神经干细胞不

5、同时间点JNK磷酸化的表达。6.应用MTT法检测SP600125干预Aβl-40诱导的神经干细胞存活率的变化。7.应用Hoechst33342染色法在荧光显微镜紫外激发下观察神经干细胞凋亡的形态学变化。8.应用比色法检测SP600125干预后Aβ1-40诱导的神经干细胞Caspase-3活性的变化。9.由于Aβl-40诱导的神经干细胞JNK磷酸化激活在24h达到高峰，故在这个时间点，孵育前30min加入TEA5mM，应用Westernblot方法检测TEA对Aβl-40诱导的神经干细胞JNK磷酸化的影响。结果：1.12h内新生大鼠海马区分离的单个

6、神经干细胞相互聚集成团状，3d后呈透亮的圆形，传代培养至第三代可见培养液中形成较大的神经球，神经干细胞标记性蛋白Nestin的表达阳性。2.1TEA对Aβ1-40诱导的神经干细胞存活率的影响，结果显示：与空白对照组相比Aβ1-40组神经干细胞存活数明显减少(p＜0.05)，且随时间延长神经干细胞存活率下降。与Aβ1-40组相比Aβ1-40+TEA组神经干细胞存活率明显升高(p＜0.05)。2.2TEA对Aβ1-40诱导的神经干细胞凋亡的影响。结果显示：荧光显微镜下Aβl-40组神经干细胞48h后出现部分细胞核呈浓染的碎块状，为典型的凋亡形态学改变

7、。与Aβl-40组相比Aβ1-40＋TEA组神经干细胞凋亡形态学变化少，凋亡率11.6%±0.4%，差异具有显著性(p＜0.01)。2.3TEA对Aβ1-40诱导的神经干细胞Caspase-3活性的影响。结果显示：与Aβl-40组相比Aβ1-40＋TEA组在各时间点均可降低Caspase-3的表达(p＜0.05)，-1-佳木斯大学临床医学专业硕士学位论文特别在24h这个时间点更为明显(p＜0.01)，TEA可明显阻止Aβl-40诱导凋亡蛋白Caspase-3的发生。3.1Aβ1-40诱导神经干细胞JNK磷酸化的表达。结果显示：在不同时间点，神经干

8、细胞经Aβ1-405μM孵育后，JNK的磷酸化均有表达。与空白对照组相比Aβl-40组JNK磷酸化水平随着时间的延长表达逐渐增加，在24