马腺疫链球菌的分离鉴定及fn结合蛋白免疫原性的研究

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1、万方数据独创性声明本人声明所呈交的论文是我个人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。尽我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得新疆农业大学或其他教育单位的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。研究生签名：白7君吟I固时间：弘，昨朔锣日关于学位论文使用授权的说明本人完全了解新疆农业大学有关保留、使用学位论文的规定，即：新疆农业大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子文档，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编

2、学位论文，允许论文被查阅和借阅。本人授权新疆农业．大学’●将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以公布。(包括刊登)论文的全部或部分内容。(保密的学位论文在解密后应遵守此协议)研究生签导师签名时间：弦·牛年‘月，；日时间：矽，牛年‘月，多日万方数据本文是国家星火计划项目“孕马标准化养殖技术集成与示范推广”(项目编号：2011GA890008)和自治区重大专项“建立孕马疾病综合防控模式、乳用马疫病防控技术研究与示范、速步马疾病防控技术研究与示范刀(项目编号：201130101．4．6、201130101-3．2、201130101-1．6)的部分研究成

3、果‘课题主持人：冉多良教授万方数据马腺疫链球菌的分离鉴定及刚结合蛋白免疫原性的研究摘要本实验通过分离鉴定马腺疫链球菌新疆株并对马腺疫链球菌新疆株的FNE和FNEB基因的克隆及原核表达，获得FNE和FNEB截短基因编码的蛋白，并免疫小鼠分析表达产物的免疫原性。本研究从马腺疫病马的脓汁中分离纯化得到革兰氏阳性球菌，经生化和PCR鉴定出该菌为马腺疫链球菌，其对小鼠具有致病性。采用特异性引物PCR扩增马腺疫链球菌新疆株FNE基因片段和FNEB基因部分片段，克隆至pMDl9-T载体。利用分子生物学软件分析测序结果，将FNE和FNEB部分基因亚克隆至原核表达载体．pET-30

4、a中，转化大肠杆菌BL21(DE3)感受态细胞，．以IPTG诱?’，’导FNE和FNEB重组蛋白的表达，经SDS．PAGE分析在46ld)和58kD处出现明显条带，Westernblot分析显示具有反应原性。纯化表达的融合蛋白免疫小鼠，以马腺疫链球菌新疆分离株攻毒免疫的小鼠后，FNE免疫组小鼠无保护力而FNEB免疫组小鼠的保护率约为600,4，表明FNEB蛋白具有较好的免疫保护性。本研究成功的从新疆伊犁地区分离出一株马腺疫链球菌新疆株，成功克隆和表达了马腺疫链球菌的FNE和FNEB截短基因，免疫小鼠获得较好的保护效果，为重组马腺疫链球菌FNE和FNEB蛋白亚单位疫

5、苗的研制奠定基础。关键词：马腺疫链球菌：分离鉴定；FNE基因：FNEB基因：原核表达；免疫保护万方数据IsolationandidentificationofStreptococcushorsestranglesandFNbindingproteinimmunogenicitystudyAbstractInthisstudy,Byseparatingandtheidentificationofstreplococc憾horsestranglesfromXinjiang．CloningandprokaryoticexpressionofStreptococcusho

6、rsestranglesfromXinjiangFNEandFNEBgenes．GettingtheFNEandFNEBtruncatedproteintoimmunizedmice．Analyzingtheimmunogenicityoftheexpressedproduct．SeparatingandgettingGram-positiveCoccifromthepusintheincidenceofhorsesbytheclinicalmanifestationsofStreptococcus’horsestrangles．WhichoneisStrepto

7、coccusequibybiochemicalidentificationandPCRidentification．Itcouldpathogenicinmice．AfragmentofFNEgeneandFNEBgeneareamplifiedfromStreptococcusequisubsp．equiisolatedfromXinjiangbyPCRandclonedintopMDl9-Tvector．Afterseq矾nceanalysisbymolecularbiologysoft'wares，thetruncatedFNEgeneandFNEBgene

8、aresu