鳖源嗜水气单胞菌的分离鉴定及主要外膜蛋白的免疫原性研究

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1、浙江万里学院硕士专业学位论文题目：鳖源嗜水气单胞菌的分离鉴定及主要外膜蛋白的免疫原性研究Title:Isolation,identificationofAeromonashydrophilafromPelodiscussisnensisandimmunogenicityanalysismajoroutermembraneproteinsofthebacteria研究生姓名：秦杨蕾校内导师：钱国英毛芝娟校外导师：申屠基康专业学位类别：工程硕士专业学位专业学位领域：生物工程所在学院：生物与环境学院论文提交日期201

2、5年12月31日中图分类号：单位代码：10876学号：密级：公开浙江万里学院硕士专业学位论文题目：鳖源嗜水气单胞菌的分离鉴定及主要外膜蛋白的免疫原性研究Title:Isolation,identificationofAeromonashydrophilafromPelodiscussisnensisandimmunogenicityanalysismajoroutermembraneproteinsofthebacteria研究生姓名：秦杨蕾校内导师：钱国英毛芝娟校外导师：申屠基康专业学位类别：工程硕士专业学位

3、领域：生物工程所在学院：生物与环境学院论文提交日期2015年12月31日鳖源嗜水气单胞菌的分离鉴定及主要外膜蛋白的免疫研究论文作者签名:指导教师签名:答辩委员会主席：宁波大学王国良委员1：海通食品集团股份有限公司孙金才委员2：浙江万里学院吴月燕委员3：浙江万里学院戚向阳委员4：浙江万里学院包永波答辩日期：2015年12月24日浙江万里学院研究生学位论文独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成

4、果,也不包含为获得浙江万里学院或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。对本文的研究做出重要贡献的人和集体,均在文中以明确方式标明。学位论文作者签名:磷彳b篝日期:》s年r冫月丿日浙江万里学院学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解浙江万里学院有关保留、使用学位论文的规定,同意浙江万里学院保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版,允许论文被查阅和借阅。本人授权浙江万里学院可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。(保密的学位论文

5、在解密后适用本授权书)保密□在~年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保√(请在以上方框内打“V’’)学位论文作者签名:庥甲0嘴摘要目的依据“科赫法则”分离鉴定中华鳖致病菌；探索嗜水气单胞菌表面抗原的免疫活性；以合适的途径免疫中华鳖，检测中华鳖免疫学因子和抗病能力的变化，以期筛选到合适的嗜水气单胞菌共同保护性抗原。方法①通过生理生化鉴定、毒力因子、16SrRNA及动物回归感染试验鉴定分离菌；②设计并合成4对外膜蛋白特异性引物，构建外膜蛋白pET30a原核表达载体，转入BL21中进行原核表达；③制备嗜水气单胞菌的

6、主要外膜蛋白，即4种外膜蛋白，注射免疫中华鳖，免疫28天后，取中华鳖血清检测抗体效价；免疫28天和免疫35天后，通过人工攻击试验检测免疫保护率。结果①分离鉴定到数株鳖源嗜水气单胞菌，分离菌氧化酶阳性，能利用葡萄糖、麦芽糖等多种糖苷类；具有运动性；分离菌可检测到毒力因子气溶素和血溶素；②成功构建4种外膜蛋白的表达菌株，SDS-PAGE检测条带显示表达蛋白大小与预期蛋白大小一致；③所有免疫组都激发了显著的体液和非特异性免疫应答，在人工攻击后OmpTS和Omp38起到了有效的免疫保护作用，但OmpF和Aha1未起到有

7、效的免疫保护作用。结论①生理生化鉴定、毒力因子及16SrRNA结果表明分离菌为嗜水气单胞菌，动物实验表明分离菌有较强的致病性；②4种重组外膜蛋白在大肠杆菌中准确表达；③OmpTS和Omp38起到了有效的免疫保护作用，提示了此两种外膜蛋白作为疫苗研制过程中候选抗原的可能性。关键词：中华鳖；嗜水气单胞菌；外膜蛋白；免疫原性IABSTRACTObjectiveUsingKochpostulatestoisolateandidentificatepathogenicbacteriafrompelodiscussisne

8、nsis;VaccinationefficiencyofsurfaceantigensofAeromonashydrophila;Withappropriatewaytoimmunizepelodiscussisnensisdetectingthechangeofimmunologicalfactorsanddiseaseresistance,toselectthecommomprpt