离子注入水稻愈伤组织提高农杆菌转化效率的初步研究

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1、维普资讯http://www.cqvip.com第9卷第1期激光生物学报Vol-9N。·挛红吴丽芳余增亮(中国科学院等离予所—蓠生物工程实验室台肥230031)摘要通过GUS报告基冈表逃的组织化学染色分析，我】发现低能氮离子．康注入水稻愈协组织可显著一提高根癌农杆转菌开导转基因效率，这为克眼单子叶值物对根癌农杆菌不敏感性、提高遗传转化效率的研究提供了一条新的途桩。关健词堡堂妻王垄；弱；堤垂垂赶堕；童监筮丑奎鼍中图分类号Q53；$511；Q78文献标识码A文章编号1oo7—7146(2000)01—00]9一。4Impl

2、antationRaiseTransformationEfficiencyo一匍fRiceCallusMediatedbygr。6“Pr“，tumefaciensLIHongwULl—jmlgYUzHg—liang(IonbeamBioengineeringLaboratory，InslituteofPlasmaPhysics，ChineseAcademyofScience，Hefei230031)AbstractInresearchofAgrobacteriumturnaciensmediatedtransforma

3、tionofricecallus，histochemicalanalysisofGUSreportergeneshowedthatricecalluspretreatedwithionsimplantationwereeasiertobetransformedbyAgrobacteriumtumefaciens．ThisprovideanewwaytOovercometherecalcitranceofcerealplantstoAgrobacteriumCv：Jne“eHsKeyWordslowenergyionbe

4、amimplanlat[on；rice；Agrobacteriumtumefaciens；transformationefficiency根癌农杆菌介导的植物转基因系统是一种天乙酰丁香酮(AS)等0Bidney等报道用基因枪轰然有效的遗传工程系统，目前在大多数双子叶植击烟草和向日葵顶端分生组织．造成细小的伤口，物和少数单子叶植物转化中取得了很好的效果。再进行农杆菌侵染，取得了比刀切等方法大100由于单子叶植物不是农杆菌的天然寄主，农杆菌倍的转化效率]另外，Kohler和Bened[ksson等介导转基因技术在禾谷类农作

5、物应用中一度陷于分别报道先用电离射线(如10—15GY的x射线)固境。直到1993年以后，这方面研究取得了可喜或非电离射线(20】m的紫外线)处理受体植物细的突破，使之又成为科学家们研究的热电。胞(烟草、矮牵牛、黑芥等)，而后再施以转基因处目前的研究进展认为，农杆菌转化水稻成功的关理，可提高转化频率3—7倍’。这说明不同转基键是(1)选用细胞分裂较快、含有胚眭细胞的组因方法或某些物理因素与农杆菌介导转化技术联织作为转基因受体材料，如幺灯胚、成熟胚盾片来源用能有效地提高转化效率的愈伤组织等；(2)增强农杆菌感染能力，如使

6、用载能离子注入复杂生物体在自然界是一种客超双元质粒载体；(3)增强受体材料被有效感染观现实，1989年余增亮首次提出注入离子与生物的能力，如改变刨伤方式、添加创伤反应诱导物体相互作用原初过程三因子效应，即能量沉积效裔嚣墨品基叠重大项日资助‘编号“989o鲫∞和国家重点科技攻关项目资助‘编号；一53。～一吡维普资讯http://www.cqvip.com激光生物学报第9卷应、质量沉积效应和电荷交换效应，引起物理学家广亲和粳稻02428，由安徽省农科院水稻研和生物学家广泛的重视，目前离子注入生物学效究昕提供。应研究和离子束

7、生物技术应用研究蓬勃发展。本2质粒及菌株实验选用水稻盾片来源的新鲜愈伤组织，经离子质粒pCAMBIA1301含有潮霉素柬注入处理后以根癌农杆菌感染，发现离子注入(hygromycin)抗性基因HPT基因和GUS报告显著增强了根癌农扦菌对愈伤组织的侵染转化效基因，物理图谱见图l。其中GUS基因编码区有率。一内含子，使GUS基因只能在植物中表达而不能在细菌中表达，从而在组织化学分析中不会1实验材料与方法出现假阳性；根癌农杆菌菌株为LBA4404。1水稻品种(MV35SHYGfRJCaMV35SCaMV35S3一G[ucur

8、onidaseNOS~IyA肿APromotert’romoleyFig．1Partialphysicalmap0fplasmidpCAMBIA1301【11837bp)3化学试剂2结果与讨论x—G1uc、潮霉素HygromycinB为Sigma公司产品，其它均为国产分析纯化学试剂。取共培养3天的愈伤组织块做GUS活性检4根癌农杆