紫红素与氟康唑影响白念珠菌生物膜形成的比较

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1、万方数据复旦大学硕士学位论文紫红素与氟康唑影响白念珠菌生物膜形成的比较ComparisonofPurpurinandFluconazoleEffectingontheFormationofCandidaalbicansBiofilms院系：华山医院专业：口腔临床医学姓名：张慧导师：孙红英教授指导老师：李继扬教授万方数据目录一l黜嬲中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯3缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯6前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯7日U青⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯’7第一部分口腔白念珠菌生物膜模型的构建⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯lO弓I言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯10材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯14讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯⋯⋯⋯17第二部分紫红素和氟康唑对白念珠菌生物膜的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯19材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯21实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯25讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33第三部分紫红素和氟康唑对白念珠菌生物膜黏附过程的影响⋯⋯⋯⋯⋯⋯35引言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35材料与方法⋯

4、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯36实验结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯40讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯46全文总结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49研究特色与创新⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯49参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯50附录综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯54在读期间发表的文章⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯62课题资助基金⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯63致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯64万方数据复旦大学硕士学位论文紫红素与氟康唑影响白念珠菌生物膜形成的比较中文摘要目的：本实验拟通过体外构建白念珠菌生物膜的可重复模型，观察分析紫红素和氟康唑对白念珠茵生物膜形态结构及线粒体的影响，并从基因角度检测黏附相关基因ALS1、ALS4、EFGl和HWP1的表达水平变化，以期初步探索紫红素对白念珠菌生物膜黏附过程的抑制机制。方法：1．白念

6、珠菌生物膜构建及鉴定：选择白念珠菌标准株ATCC90028体外构建生物膜模型，利用倒置相差显微镜、扫描电镜及激光共聚焦显微镜观察生物膜的形态结构，并通过XTT减低法测定白念珠菌生物膜的动力生长曲线，明确生长对数期及衰亡期。2．紫红素和氟康唑对白念珠菌生物膜形成过程的影响：通过XTT减低法和细胞毒性实验确定紫红素的最佳作用浓度，并通过倒置相差显微镜、扫描电镜及激光共聚焦显微镜三种方法观察药物作用后生物膜的结构变化情况。3．紫红素和氟康唑对白念珠菌生物膜黏附过程的影响：倒置相差显微镜下观察紫红素和氟康唑对黏附过

7、程的影响；利用称量干重的方法、基因检测ALSl、ALS4、EFGl和HWPl表达水平的变化定量分析紫红素和氟康唑对黏附过程的影响，并通过激光共聚焦显微镜观察紫红素和氟康唑对生物膜线粒体的影响，初步探索黏附作用机制。结果：1．白念珠菌生物膜的体外模型稳定且可重复性高，镜下生物膜呈典型的网状结构，0．01％结晶紫染色后可见菌丝结构及胞外基质。白念珠菌生物膜的动力生长曲线基万方数据复旦大学硕士学位论文本呈“S"型，对数生长期大约为12,--48h，稳定期为48,--60h为，60h后开始进入衰亡期。2．XTT减低

8、法和细胞毒性实验确定紫红素最佳作用浓度为2099／mL，该浓度既能达到良好的抑制作用，又不致于对人体正常成纤维细胞造成伤害；倒置相差显微镜、扫描电镜及激光共聚焦显微镜下可观察到不同浓度紫红素和氟康唑作用后生物膜的形态，2099／mL紫红素作用后的生物膜不能形成正常的菌丝且结构松散、胞外基质几乎没有。3．倒置相差显微镜下2099／mL紫红素作用2h的生物膜细胞量少于1281ag／mL氟康唑组及正常对照组；作用48后