固态发酵生产植酸酶的研究(1)

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1、营养保健固态发酵生产植酸酶的研究韩建春12,陈成(1.东北农业大学食品学院,哈尔滨150030;2.黑龙江省轻工科学研究院,哈尔滨150001)摘要:阐述以AS3.4309为出发菌株,采用紫外线和EB的复合诱变获得植酸酶高产菌AS3.4309-12作为发酵菌株。确定液体种子最佳发酵条件为:发酵温度30℃,摇瓶速度为210r/min,装液量为50mL/250mL三角瓶,pH5.5,培养基为5%的玉米淀粉和0.5%(NH4)2SO4,孢子接种量2%。确定最佳固态发酵条件:发酵温度30℃,玉米面和麸皮比例4∶6,最初pH5,培养基水分5

2、1.3%,液体种子接种量5%,发酵时间108h。关键词:诱变;植酸酶;孢子;发酵中图分类号:TS205.5文献标志码:A文章编号:1005-9989(2008)10-0266-05StudyonprocessingphytasebysolidfermentHANJian-chun1,CHENCheng2(1.CollegeofFoodScience,NortheastAgricultureUniversity,Harbin150030;2.HeilongjiangLightIndustryAcademe,Harbin150001)

3、Abstract:AspergillusnigerAS3.4309wasinducedmutagenesisbyUVandEB.WegottheculturestartsofhighsecretionphytaseAS3.4309-12.Parametersoffermentculturestartersconditionswere30℃,210r/min,pH5.5,cornstarch5%,0.5%(NH4)2SO4,inoculatecapacity2%.Finallywegotthebestparametersofsoli

4、dfermentphytase:30℃,pH5,inoculatecapacity5%,watercapacity51.3%,cornflourtobranis4:6,fermenttimeis108h.Keywords:induce;phytase;spore;ferment植酸学名为肌醇六磷酸,化学名称为环己六醇出的磷达250万t之多,是水体富营养化污染的主磷酸酯,分子式为C要原因之一[2]6H18O24P6,它是一种淡黄色或淡。褐色的黏稠液体,溶于水、乙醇和丙酮。植酸广泛植酸酶的来源有两种,一是植物性饲料本身含地分布于植物性

5、饲料中,植酸本身的毒性很小,但有一定数量的内源性植酸酶,种子萌发时,植酸酶被有较强的抗营养作用,植酸带负电荷,具有强大的激活并水解种子中的植酸,释放磷元素,供植物生长鳌合能力,其作用的pH范围很广,尤其在酸性至需要。另外,微生物发酵也可产生植酸酶。由于植物中性范围内(与胃肠pH范围一致),其螯合作用更显和动物来源的植酸酶不能形成生产规模,并且作用范著[1,4]围没有微生物来源广泛,稳定性也比微生物来源差,。植物中的磷大部分(60%~70%)以植酸磷的形式存在,单胃动物消化道中无植酸酶,饲料中大量的因此目前研究都集中于微生物植酸酶[

6、3]。本项目以黑植酸磷不能被利用而随粪便排入环境,既浪费资源,曲霉AS3.4309为出发菌株,通过一系列诱变手段获又对环境造成了磷污染,我国每年从畜禽粪便中排得高产菌株,并以玉米为主要原料的培养基进行固态收稿日期:2008-07-08作者简介:韩建春(1973—),男,博士。266No.10.2008营养保健发酵,进行生产微生物植酸酶。(1)粗筛:由于平板培养基以不溶性植酸钙为唯一磷源,这就使得平板呈现白色混浊。用移液枪1材料与方法吸取0.1mL诱变剂处理的孢子悬液(可适当稀释)1.1材料涂于平板后,黑曲霉产生的植酸酶使菌落周围出

7、现1.1.1菌种黑曲霉AS3.4309:中科院微生物研究所。明显的透明圈,挑取透明圈直径与菌落直径比值大1.1.2主要仪器隔水式电热恒温培养箱、超净工作的菌落。台:上海跃进医疗器械厂;101-2型电热鼓风干燥(2)复筛:初筛得到的产酶菌株经斜面活化后,箱:中国河北黄骅航天仪器厂;ZD-880振荡器:哈按下述培养方法培养,进行酶活测定,突变株与对尔滨东联电子有限公司;座式自动电热压力蒸气灭照菌株相比较,相对酶活≤90%的为负突变株,相对菌器:上海申安医疗器械厂;电子天平:北京赛多利酶活≥110%的为正突变株,相对酶活在90%～110

8、%斯仪器系统有限公司。的视为等性突变菌株。摇瓶培养条件为:250mL三1.1.3化学试剂蔗糖、葡萄糖、硝酸钠、氯化钾、角瓶装液量50mL,接种两环孢子,于30℃,210r/硫酸镁、硫酸亚铁、磷酸二氢钾、氯化钠、碳酸钙:min旋转式摇床上培养4d,根