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1、产植酸酶菌株青霉P11发酵条件的研究摘要：研究了不同碳源、氮源等对青霉p11液体发酵产植酸酶的影响。菌株P11发酵产植酸酶的最佳碳源为蔗糖，氮源为蛋白腺和硝酸钱。最适发酵产酶条件为培养温度30°C,发酵培养基最适pH值5,摇瓶装液量10%,接种量4%,摇床转速120r/min,培养时间96h,最高酶活性可达2.63U/mLo关键词：青霉P11；植酸酶；产酶条件；酶活中图分类号：Q939.97文献标识码：A文章编号：0439-811406-1269-03StudiesontheCultureConditionsofPhytase
2、ProducingPenicilliumPllHUANGFang-yi1,ZHONGYi2,LIUYanlOUSbonandnitrnsoufermentatioofPenici11iumPllthatproducesphytasewasstudied・Theresultsindicatedthatthebestcarbonandnitrogencompoundsforthisstrainweresucrose,peptoneandammoniumnitraterespecTheoptimumproducingconditio
3、nwascultivateureat30°C,pHofthentationmediumat5；mediumquantity,10%；inoculationproportion,4%；rotatespeedoftheshaker,120r/min；fermentationtime,96h.Thehighestenzymeactivitycouldreach2.63U/mL.Keywords：Peniciphytase；enzymeproducingcondition；enzymeactivit植酸酶是催化植酸水解成肌醇与磷酸的一
4、类酶的总称。它能水解植酸而释放出无机磷，是一种优良的环保型食饲两用酶制剂。其生产主要来源于微生物，且绝大多数属于酸性植酸酶。一般来讲，微生物源植酸酶最适PH值范围较植物源的宽，细菌源植酸酶最适PH值一般为中性或偏碱性，真菌源植酸酶最适PH值为2.5〜7.0,最适温度为40〜60°C［1一3］。大多数微生物植酸酶适宜pH值在酸性范围内，接近动物胃、肠道内的PH值，因而能在动物胃、肠道内保持较高活性并发挥催化作用。褚西宁等［4］在国内首次分离到一种产植酸酶的青霉菌一一变灰青霉。随后，白玉明等［5］、陈旭等［6］、何平等［7,8］、
5、王尊生等［9］、刘红蕾等［10］也对产植酸酶青霉菌进行了不同程度的研究。当前，国外使用的植酸酶产生菌以NRRL3135菌株研究得较为详细［11］。本研究用正交试验对一株产植酸酶的青霉P11的产酶培养基及产酶条件进行优化，以期为植酸酶性质研究和工业化生产提供一些基础资料。1材料与方法1.1材料1.1.1青霉青霉保藏于武汉生物工程学院发酵工程实验室。1.1.2培养基斜面培养基：PDA培养基；发酵培养基：碳源4.0%、氮源总量1.0%、KC10.05%、MgSO4・7H2O0.05%、FeSO4・7H2O0.003%、MnS04・4
6、H200.002%。1.2方法1.2.1摇瓶培养将活化的青霉P11接种于250mL摇瓶中，置于转速为120r/min的摇床上，30°C发酵培养4〜5do1.2.2酶活的测定在反应试管中加入0.5mL20mmol/L植酸和3mL乙酸缓冲液，50°C保温30min,加入0.5mL植酸酶酶液，反应30min后，用2mL10%TCA终止反应，测定发酵液中无机磷的含量［12］。一个酶活性单位定义为：样品在指定的温度、PH值等条件下，每分钟释放出1ymo1无机磷所需的酶量。酶活为每毫升酶液中所含酶活性单位。2结果与分析2.1碳源对发酵产酶
7、的影响分别以4.0%的葡萄糖、果糖、麦芽糖、蔗糖、乳糖、可溶性淀粉作为碳源，30°C、120r/min摇瓶中培养96h后测定酶活，结果见图1。该菌碳源谱较广，对乳糖的利用能力最弱，发酵产酶活性远远低于其他碳源；对蔗糖的利用能力最强，明显优于其他碳源，蔗糖来源广泛，价格低廉，适合工业化生产，文献】13,14］中也有蔗糖有利于产酶的报道。2.2氮源对发酵产酶的影响以质量分数4.0%的蔗糖为碳源。分别以有机氮和无机氮作氮源，氮源质量分数为1.0%,培养后测定结果见图2。该菌的氮源谱也比较广，不但可以利用有机氮为氮源，也可以利用无机氮
8、为氮源进行发酵产酶。以蛋白腺、硝酸鞍分别作为氮源时植酸酶活性最高，考虑迟效和速效氮源搭配使用，因此选择蛋白腺、硝酸镀分别作为有机和无机氮源。2.3正交试验对碳源含量和两种氮源含量进行正交试验优化，因素与水平设计见表1,正交试验结果见表2o根据表2可知各因素作用的主次顺序为：蔗
