表达内皮抑素的rcho细胞的微囊化培养

《表达内皮抑素的rcho细胞的微囊化培养》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在教育资源-天天文库。

1、中国生物工程杂志ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，２００７，２７（９）：１～７殏檪檪檪檪檪檪檪檪殏檪檪研究报告檪檪殏檪檪檪檪檪檪檪檪殏表达内皮抑素的ｒＣＨＯ细胞的微囊化培养１，２１１，２１１１１张英王为吕国军于炜婷郭昕雄鹰马小军（１中国科学院大连化学物理研究所大连１１６０２３２中国科学院研究生院北京１０００３９）摘要微囊化重组细胞移植治疗肿瘤是一种新兴的肿瘤基因治疗方法，如果将此技术应用到临床研究，就需要制备大量的细胞活性良好、重组蛋白表达量高的生物微胶囊。种子细胞是生物微胶囊治疗作用的执行者，是构建微囊微反应器的基

2、本元素。如何获得大量高活性的种子细胞已经成为规模化制备生物微胶囊所面临的关键的限制因素。考察了搅拌式生物反应器内扩增的ｒＣＨＯ细胞进行包囊及微囊化细胞在生物反应器内规模化培养的可行性。实验结果显示：ｒＣＨＯ细胞在生物反应器内可以快速生长，并且对数期细胞包囊，微囊化细胞活性良好。制备的微囊化细胞可以在生物反应器内培养，与培养板培养比较细胞生长较快、内皮抑素表达量较高。应用生物反应器培养技术能够在体外快速、大量扩增ｒＣＨＯ细胞，满足微囊化细胞制备对种子细胞量与质的要求，微囊化细胞可以在生物反应器内培养。关键词微胶囊种子细胞培养生物

3、反应器规模化培养ｒＣＨＯ细胞中图分类号Ｑ８１３．１［１］１９５７年，Ｃｈａｎｇ受细胞膜的启发，提出了人工细备出大量的生长状态良好、产物分泌旺盛的微囊化细［１１］胞的概念，将酶、蛋白质和激素等生物活性物质包封在胞，因此有必要对微囊化细胞规模化制备和培养进微胶囊内，从而达到了持续分泌的目的。生物微胶囊行研究。膜具有选择透过特性，它允许小分子量物质如葡萄糖、种子细胞是生物微胶囊治疗作用的执行者，是构［１２］氧气等营养物自由通过，确保囊内细胞存活及维持正建微囊微反应器的基本元素。目前实验室研究中大常生理功能，并允许囊内细胞表达的小分子

4、治疗因子多是利用方瓶进行种子细胞的扩增培养，设备要求低，如胰岛素、多巴胺等释出囊外，对病变机体进行治疗和容易开展相应的工作。但存在许多缺陷，如：操作繁调节，同时阻止宿主免疫细胞和抗体等通过微囊膜，避琐、放大困难；频繁换液增加污染几率；每次换液导致免了对细胞的免疫排斥作用。目前生物微囊技术已广细胞外微环境的骤变，影响细胞增殖；多次传代后细胞［２～４］泛应用到异体组织细胞移植、微生物和动植物细胞功能老化等。在生物微胶囊治疗的基础及将来的产业［５，６］［７～９］的大规模培养、药物控制释放、抗癌药物筛化研究中都需要培养出大量活性良好的

5、种子细胞，因［１０］选等领域。然而，由于目前微囊化细胞制备和培养此如何在短期内获得大量活性良好的种子细胞对生物［１３］的研究仅限于小规模实验室范围，无法满足临床需求。微胶囊治疗至关重要。应用生物反应器进行种子细如果将微囊化细胞移植技术推广到临床应用，必需制胞大规模培养可以在较短时间大量扩增种子细胞，满足生物微胶囊规模化制备的需要。本文着重研究采用生物反应器大规模培养种子细胞和增殖细胞包囊的可收稿日期：２００７０４０４修回日期：２００７０６１１行性及微囊化细胞在生物反应器内的生长和重组蛋白国家自然科学基金重点项目（２０

6、２３６０４０），国家“９７３”计划资助项目（２００５ＣＢ５２２７０２），辽宁省自然科学基金资助项目（２００６２１４９）表达规律。通讯作者，电子信箱：ｍａｘｊ＠ｄｉｃｐ．ａｃ．ｃｎ２中国生物工程杂志ＣｈｉｎａＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙＶｏｌ．２７Ｎｏ．９２００７１．２．４微囊化细胞在生物反应器内规模化培养生１材料与方法物反应器（Ｂ．Ｂｒａｕｎ２）培养微囊化ｒＣＨＯ细胞时微囊１．１材料接种量为５％（微囊／培养液，Ｖ／Ｖ），细胞接种密度为６１．１．１细胞株及试剂表达人重组内皮抑素的中国２．０×１０ｃｅｌｌｓ／ｍｌｍｉｃｒｏｃａｐ

7、ｓｕｌｅ，培养温度３７℃，仓鼠卵巢细胞（ＣＨＯｅｎｄｏ），由中国科学院上海细胞ｐＨ７．２０，搅拌速度５０ｒ／ｍｉｎ，ＯＤ（溶解氧）４０％～６０％。所藤怀宁博士惠赠。基础培养基为ＤＭＥＭ／Ｆ１２培养液采用批式换液培养方式，每２ｄ通过细胞截留系统换液（美国，Ｓｉｇｍａ公司），添加１０％的新生牛血清（中国，０．５个工作体积，将微胶囊截留在反应器中，收获上清北京三利生物制品厂）、１００ｕｎｉｔｓ／ｍｌ的青霉素、１００μｇ／并加入新鲜培养基。ｍｌ的链霉素、５μｇ／ｍｌ的嘌呤霉素（美国，Ｓｉｇｍａ公司），１．２．５种子细胞计数方法在培养

8、过程中总细胞密海藻酸钠（Ａｌｇｉｎａｔｅ）、聚赖氨酸（ＰｏｌｙＬｌｙｓｉｎｅ）、四甲度采用血球计数板计数。活细胞密度采用台盼蓝拒染基偶氮唑盐（ＭＴＴ）购自Ｓｉｇｍａ公司，其它试剂均为国法计数。首先取待测的细胞悬液０．１ｍｌ加ＤＨａｎｋｓ液产分析纯产品。０．８ｍｌ及０．３