新型联合基质桥接大鼠脊髓横断性损伤断端促进运动功能恢复实验研究

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1、·1376·ChineseJournalofReparativeandReconstructiveSurgery,November2009,Vol.23,No.11新型联合基质桥接大鼠脊髓横断性损伤断端促进运动功能恢复实验研究1121111梁洪生梁鹏高爱丽祁权刘恩重吴佳宁徐小平【摘 要】目的研究新型联合基质——BMSCs-去上皮细胞羊膜（denudedhumanamnioticmembrane，DHAM）桥接大鼠脊髓横断性损伤断端，促进轴突再生及提高后肢运动功能的作用。 方法取健康产妇正常剖宫产术后自愿捐献的羊膜，经联合

2、消化法彻底去除表面上皮细胞制备DHAM，并行HE染色观察。健康4周龄雌性Wistar大鼠4只，取骨髓行BMSCs分离、培养，取第4代细胞以PKH26标记后，以1×105个/cm2密度接种于DHAM上制备联合基质（BMSCs-DHAM）。倒置相差显微镜和激光共聚焦显微镜观察BMSCs生长状态。另取8周龄雌性Wistar大鼠40只，体重200～220g，制备T9脊髓横断性损伤模型，随机分为4组，每组10只。A、C组分别用BMSCs-DHAM和单纯DHAM包裹脊髓的2个断端，B、D组分别于脊髓损伤中心注射10μL细胞浓度为1×

3、104个/μL的BMSCs和等量生理盐水。术后12周采用BBB运动评分检测大鼠后肢运动功能恢复情况，行皮层运动诱发电位（motionevokedpotential，MEP）测定；生物素化葡聚糖胺（biopinylateddextanamine，BDA）顺行示踪检测及神经丝蛋白200（neurofilamentprotein200，NF-200）免疫荧光染色观察。结果HE染色显示联合消化法成功制备DHAM。镜下观察到BMSCs在DHAM上生长状态良好。术后12周，A组BBB评分达（12.50±1.26）分，明显高于其余各组

4、（P<0.05）。MEP测定显示，A组潜伏期（3.52±2.45）ms及波幅（480.68±18.41）µV，恢复效果优于其余各组（P<0.05）。BDA顺行示踪观察示，A组损伤平面以下BDA通过损伤部位的轴突再生率为54.12%±3.30%，均高于其余各组（P<0.05）；且A组NF-200免疫荧光染色亦可见大量再生轴突通过损伤部位。结论新型联合基质BMSCs-DHAM一定程度上提高了脊髓横断性损伤大鼠的后肢运动功能，是一种具有广泛应用前景的基质材料。【关键词】组织工程BMSCs去上皮细胞羊膜脊髓损伤轴突再生大鼠中图分

5、类号：R651.2R318.08文献标志码：AANEWCOMPOSITEMATRIXBRIDGINGBOTHSTUMPSOFSPINALCORDTRANSECTIONINRATSTO11211PROMOTERECOVERYOFMOTORFUNCTION/LIANGHongsheng,LIANGPeng,GAOAili,QiQuan,LIUEnzhong,111WUJianing,XUXiaoping.TheFirstAffiliatedHospitalofHarbinMedicalUniversity,HarbinHei

6、longjiang,150001,P.R.China;2CollegeofLifeSciences,NortheastAgriculturalUniversity.Correspondingauthor:LIANGPeng,E-mail:Liangpengd@gmail.com【Abstract】ObjectiveToinvestigateanewcompositematrix(BMSCsseededonthedenudedhumanamnioticmembrane,BMSCs-DHAM)bridgingtheboths

7、tumpsofspinalcordinjuryinratstopromoteaxonregenerationandimprovemotorfunctionofhindlimbs.MethodsThehumanamnioticmembrane(HAM)wasvoluntarilydonatedbythehealthypregnantwomenafteracaesareansection.ThecellsontheHAMwerecompletelyremovedwithatrypticandmechanicalapproac

8、htoprepareDHAM.TheBMSCswereseparatedandculturedfrom4-week-oldfemalerats(n=4),thentheforthpassageofBMSCswerelabeledbyPKH26andseededonDHAM(BMSCs-DHAM).Thegrowing