芍药苷抑制NF-κB信号通路促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复

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1、温州医科大学硕士学位论文分类号：R6单位代码：10343学号：151001187硕士学位论文论文题目:芍药苷抑制NF-κB信号通路促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复研究生姓名：王斌学科专业：外科学（骨科学）类型：专业型指导教师：王靖二O一八年五月温州医科大学硕士学位论文论文题目:芍药苷抑制NF-κB信号通路促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复答辩委员会主席：劳杰教授答辩委员会成员：滕红林教授杨胜武教授论文答辩日期：2018年5月25日温州医科大学硕士学位论文目录缩词简表·······················2中文摘要···

2、····················3英文摘要·······················5引言·························8材料与方法······················9结果·························18分析与讨论······················25参考文献·······················28致谢·························32综述及参考文献····················33独创性声明······

3、················411温州医科大学硕士学位论文缩词简表缩写英文全称中文全称NF-κBnuclearfactor-kappaB核转录因子κBI-κBinhibitorkappaB核转录因子κB抑制剂NOnitricoxide一氧化氮PFpaeoniflorin芍药苷MPmethylprednisolone甲泼尼龙iNOSinduciblenitricoxidesynthase诱导型一氧化氮合酶COX-2cyclooxygenase-2环氧合酶-2SCIspinalcordinjury脊髓损伤HEHema

4、toxylin–Eosin苏木精-伊红6-OHDA6-hydroxydopamine6-羟多巴胺BSAbovineserumalbumin牛血清白蛋白PMSFphenylmethylsulfonylfluoride苯甲磺酰氟化物TNF-αtumornecrosisfactor-α肿瘤坏死因子αIL-6interleukin-6白介素6IL-1βinterleukin-1β白介素1β2温州医科大学硕士学位论文芍药苷抑制NF-κB信号通路促进脊髓损伤大鼠运动功能恢复中文摘要目的：急性脊髓损伤（spinalcordinju

5、ry,SCI）是由于脊髓受到某种创伤后造成相应支配的感觉或运动功能障碍。车祸、高处坠落是目前造成脊髓损伤最主要的原因。核转录因子-κB（NF-κB）介导的神经炎症反应，是脊髓损伤的关键调控途径。芍药苷（Paeoniflorin,PF）是从芍药根中提取的主要活性成分，已被认为在中枢神经系统中发挥神经保护作用。但是芍药苷是否能促进脊髓损伤后的运动功能尚不清楚。本文旨在通过建立脊髓损伤大鼠模型，来达到下列的研究目标：1.研究芍药苷干预大鼠脊髓损伤模型中NF-κB信号通路相关蛋白分子变化规律。2.观察芍药苷干预后脊髓损伤大鼠

6、运动功能恢复情况。3.观察芍药苷对脊髓损伤后病理组织学的影响。方法：建立大鼠脊髓损伤动物模型。90只大鼠随机分为假手术（sham）组、模型(SCI)组、芍药苷给药（PF）组（每组30只）。在损伤后第1,3,7和14天，使用BBB运动功能量表，倾斜平板实验和足印分析等行为学方法评估大鼠后肢运动功能恢复情况。随后在相应的时间点，处死大鼠收集脊髓组织样本，分别采用免疫组化，Westernblot蛋白印迹等方法研究芍药干预脊髓损伤后NF-κB信号通路相关蛋白、iNOS，COX-2的变化规律。HE及尼氏染色观察芍药苷对脊髓损伤

7、后镜下病理组织学的影响，对切片进行神经元计数及病理学评分。对PC12细胞进行过氧化氢(200μM)处理，模拟神经元损伤。损伤前，PC12细胞用不同浓度（0,50,100,200和400uM）的芍药苷预处理2小时。免疫荧光观察NF-κB入核表达水平；RT-PCR检测TNF-α、IL-6和IL-1βmRNA表达；Westernblot检测PC12细胞中Bax和Bcl-2凋亡蛋白的表达；CCK-8检测细胞存活力。结果：1.脊髓损伤和给药组大鼠在1，3天时BBB评分和倾斜角度无显着差异（P>0.05）。第7天和第14天给药组

8、大鼠的BBB评分和倾斜角优于模型组（P<0.01）。3温州医科大学硕士学位论文损伤后14天，与正常步态的假手术组相比，脊髓损伤大鼠的足印则是表现为不规则的拖行线，而PF给药组表现为间断的步态脚印。2.模型组大鼠中，损伤中心失去其正常结构，表现出坏死灶。灰质中神经元出现变性，坏死和凋亡，白质在纵向切片中观察到巨大空腔。与脊髓损伤大鼠相比，从芍药苷