人脐带间充质干细胞向汗腺细胞诱导分化及向裸鼠移植的研究

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2、工作及取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢等内容外，文中不包含其他人已经发表或撰写的研究成果，指导教师对此进行了审定。本论文由本人独立撰写，文责自负。研究生签名：赵毛吨导师签章：妒黔矽，；年调诩日目录中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4研究论文人脐带间充质干细胞向汗腺细胞诱导分化及向裸鼠移植的研究前言⋯⋯⋯⋯⋯”一⋯⋯⋯⋯⋯”⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯“⋯·99日U吾⋯⋯”⋯⋯一””一⋯⋯⋯⋯”⋯⋯⋯”⋯⋯一”⋯⋯⋯⋯⋯“一”材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯

3、⋯⋯10结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯”·⋯18附图⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯20附表⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯29讨论⋯················⋯····⋯⋯·····-·⋯·····⋯·····⋯···⋯⋯···⋯·····30结论⋯⋯⋯⋯·⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯··⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯34参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34综述干细胞实现汗腺再生的研究现状⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯·⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯·⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯·

4、·46个人简历⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯47中文摘要人脐带间充质干细胞向汗腺细胞诱导分化及向裸鼠移植的研究摘要目的：人脐带间充质干细胞(uc．MSCs)具有向多种成熟细胞分化的潜能，如成软骨细胞、成骨细胞、神经细胞及成脂肪细胞等，其分离、培养较为容易，纯度高，且来源丰富，可在体外多次扩增，异体移植免疫排斥风险小。由于UC-MSCs具有以上的优点，使其逐渐被研究者所关注，尤其是在组织的修复方面，可以将其应用于器官、组织的修复及重建。本实验通过研究人脐带间充质干细胞分离，在不同条件下的培养及鉴定，得出培养人脐带间充质干细胞的最优培养条件。并进一步

5、通过间接共培养的诱导方式使其向汗腺细胞定向诱导分化，将诱导后的UC．MSCs用BrdU进行标定，移植入裸鼠皮肤，观察其在裸鼠体内的存活及分布状况。方法：1UC-MSCs的分离、培养和鉴定：获得无菌足月剖宫产健康胎儿脐带，剪刀将其剪成3-4em长短的脐带组织段，生理盐水反复冲洗，去除残留的血液，剪刀将其剪开后镊子剔除脐带中的两条脐动脉、一条脐静脉，以免被血管内皮细胞所污染。用镊子将脐带中的沃顿胶组织(Wharton’SJelly)呈条索状撕裂下来，剪刀剪成大小约lmm3的沃顿胶组织块，置于培养瓶中培养。当细胞长满瓶底后，0．25％胰酶消化贴壁细胞，进行传代。流式细胞术检

6、测培养细胞的表面抗原表达情况。2UC．MSCs生长的影响因素及生长曲线的绘制：用MTT比色法分别检测不同胎牛血清浓度在490rim处吸光度值的均数(OD值)。同样用MTT比色法分别检测当种植密度不同时在490nm处吸光度值的均数(OD值)。观察传代后不同时期UC．MSCs的生长情况，绘制生长曲线。3汗腺细胞(h-SGCs)培养：将所取正常全层皮肤，去除皮下脂肪后，剪成lmm3大小组织块，用II型胶原酶消化法获得汗腺组织，培养汗腺细胞m．SGCs)贝3壁生长；大部分汗腺团块贴壁后，进行换液，此后3。4天换液一次。对培养细胞进行免疫组化检测CEA和CK7表面抗原的表达情况

7、。4UC．MSCs诱导分化及鉴定：将培养的汗腺细胞进行47℃水浴造成中文摘要体外热休克，通过传三代(p3)UC—MSCs间接共培养诱导UC．MSCs分化为有汗腺表型的干细胞，免疫组化法检测CEA和CK7表面抗原的表达情况。5对诱导后干细胞进行核型分析：将诱导后细胞加入秋水仙素0．2mg／L一滴，低渗固定消化等处理，进行细胞染色体检测。6BrdU转染及鉴定：在传3代(p3)UC—MSCs中加入BrdU抗原401上g／ml用来标记培养基，48h后，可见UC．MSCs生长良好，悬浮细胞少，铺片用免疫组化法检测转染情况。7将诱导分化后的细胞进行裸鼠移植：将诱