zeb-1在大鼠肝纤维化模型和肝星状细胞中的动态表达及意义

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1、温州医学院硕士学位论文论文题目：兰垦旦二!国王查太鼠赶红维化撞型麴赶星鉴塑庭答辩委员会主席：壁壹羞麴援逝江太堂答辩委员会成员：塞坚胜．．麴握逝延笪鱼趔医瞳庄明左塾援湿趔医型盔堂隆垡虚塑援逝、江省鱼趔医院韭友殖麴捶遏刿医科太堂论文答辩日期：至Q!三生§旦23目．一温州医学院硕士学位论文目录缩略词表⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯4中文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5英文摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯8前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯11刖吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯l材料及方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯13结果⋯⋯⋯⋯

2、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22；口木⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯二二分析和讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28小结⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯31附录⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯33致谢⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯34综述⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯35参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯37声明⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯39温州医学院硕士学位论文缩略词表4温州医学院硕士学位论文ZEB-I因子在大鼠肝纤维化模型和肝星状细胞中的动态表达及意义中

3、文摘要目的中国是一个肝病大国，各种病因导致的肝炎、肝损伤可进一步发展为肝硬化，甚至肝癌，该病治疗效果差，病死率高，给病人及其家庭带来了大的负担，而肝纤维化(Hepaticfibrosis)是其病情发展必经阶段，近来学者们研究发现早期肝纤维化经过治疗是可以发生逆转的n，，这对阻断肝炎、肝硬化、肝癌一系列发展无疑是个好消息，于是阻断早期肝纤维化的发展甚至逆转早期病变对临床肝病的治疗显得尤为重要。ZEB一1是二锌指蛋白家族的其中一个成员，很早就有报道显示它作为细胞核转录因子参与着TGF—B通路的调控，而TGF—Bl是肝纤维化发生发展和诱导I{SC活化最关键的细胞因子，

4、由此该研究旨在通过观察ZEB—l在大鼠肝纤维化模型及肝星状细胞经TGF-131刺激后的动态变化来初步探讨它对大鼠肝纤维化的影响。方法健康雄性SD大鼠60只，分为健康对照组8只和模型组52只，模型组按造模后不同时间点分为2周，4周，6周，8周四个亚组。所有大鼠均在清洁环境下，采用王宝恩造模法模型组0．2ml／lOOg剂量经腹腔注射二甲基亚硝胺(DMN)，每周前三天每天一次，持续4周建立纤维化模型，常规喂养至8周末，每到时间点后随机处死6只，下腔静脉取血后离心取上清，测定不同时间点ALT，AST的变化；肝组织经甲醛固定、石蜡包埋、切片后经HE，Masson染色，光学

5、显微镜下观察肝组织病理变化；采用RT-PCR和Westernblotting检测不同时间点肝脏ZEB-ImRNA和蛋白的表达。大鼠HSCT-6细胞用含i0—12％胎牛血清的高糖培养基培养生长传代，至3-4代对数生长期接板，浓度为1．8×105／L，加不同浓度TGF～Bl因子刺激，每组设3个复孔，48h后提取RNA及蛋白，检测在不同TGF—B1浓度刺激下ZEB-ImRNA及蛋白的表达情况。各组间均数比较采用单因素分析。温州医学院硕士学位论文结果1．采用王宝恩方法成功诱导建立大鼠肝纤维化模型，4，6周时病理学图片显示肝内出血坏死明显，炎性细胞明显增多，肝小叶结构破坏

6、或消失，蓝色胶原纤维切割肝小叶形成假小叶。模型组血清ALT，AST在2周开始升高，4周达到最高峰(169．2±16．2，193．3±31．1)，明显高于正常对照组(29．2±4．70，42．7±6．30)。2．RT—PCR结果显示：ZEB-lmRNh在正常肝组织中少量表达，模型组表达逐渐升高，4周表达最高(3．177±0．046)，随后6、8周又逐渐降低，各模型组与对照组相比差异有统计学意义(F=66．29，p

7、-222．27，p

8、ng／LTGF—B1刺激