ut-b基因转染对56肾切除大鼠肾功能的影响

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1、上海交通大学医学院硕士学位论文UT-B基因转染对5/6肾切除大鼠肾功能的影响EffectsofUT-Bgenetransfectiononrenalfunctionin5/6subtotalnephrectomizedrats作者姓名：张征学科专业：内科学导师：蒋更如教授导师组成员：刘怡晟教授李慧凛教授黄海东教授潘曙明教授万方数据上海交通大学医学院硕士学位论文硕士学位论文论文题目:UT-B基因转染对5/6肾切除大鼠肾功能的影响作者姓名：张征学科专业：内科学申请学位级别：硕士学位研究方向：内科（肾脏病）指导教师：蒋更如教授培养单位：上海交通大学医学院附属新华医院答辩日期

2、：2013年10月资助基金：上海市科委基金项目（09ZR1419600）国家自然基金项目（81270823）万方数据上海交通大学医学院硕士学位论文SHANGHAIJIAOTONGUNIVERSITYMASTER'STHESISEffectsofUT-Bgenetransfectiononrenalfunctionin5/6subtotalnephrectomizedratsAUTHOR:ZhangZhengMAJOR：InternalMedicineBACHELOR:MasterRESEARCHFIELDS：Medicine（nephropathy）SUPERVISO

3、R：ProfessorJiangGengruUNIT：XinhuaHospitalAffiliatedtoShanghaiJiaotongUniversitySchoolofMedicineTHESISDEFENSE：2013-10UNDS：ShanghaiScienceandTechnologyCommitteeFoundation（09ZR1419600）NationalNaturalScienceFoundationofChina（81270823）万方数据上海交通大学医学院硕士学位论文上海交通大学学位论文原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的

4、指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品成果。对本文的研究做出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本人完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日万方数据上海交通大学医学院硕士学位论文上海交通大学学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权上海交通大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复

5、制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在3年解密后适用本授权书。本学位论文属于不保密□。（请在以上方框内打“√”）学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月万方数据上海交通大学医学院硕士学位论文UT-B基因转染对5/6肾切除大鼠肾功能的影响摘要目的：构建包含大鼠尿素转运蛋白B（ureatransporterB,UT-B）基因的重组腺病毒载体，研究UT-B基因转染对Caco-2细胞中UT-BmRNA和蛋白的表达及尿素转运功能的影响；构建大鼠5/6肾切除肾衰模型，研究经肠道给予重组腺病毒载体对大鼠结肠组织UT-BmRNA及蛋白的表达及血尿素氮（bloodurea

6、nitrogen,BUN）水平的影响，为肾功能不全寻找新的基因治疗手段。方法：取SD大鼠肾髓质，抽提总RNA，逆转录获得cDNA，以cDNA为模板，PCR扩增大鼠UT-B基因的CDS区全长片段，PCR产物连接至pMD-18T克隆载体，分别以克隆载体pMD18-UT-B和IRES2-EGFP质粒为模板，PCR扩增UT-B和IRES-EGFP序列，通过引物重叠区进行PCR拼接，并在UT-B-IRES-EGFP两端引入attB1、attB2重组臂序列。PCR产物经BP重组系统将UT-B-IRES-EGFP融合基因重组到入门载体pDONR221中，构建入门克隆。入门克隆与表达

7、载体pAd/CMV/V5-DEST使用LR重组系统进行体外重组，构建表达克隆pAd-UT-B-IRES-EGFP，pAd-UT-B-IRES-EGFP转化DH-5α感受态细胞，筛选阳性克隆，PCR及测序验证。pAd-UT-B-IRES-EGFP用PacI酶切线性化后由Lipofectamine2000介导转染293A细胞，包装病毒，收集病毒液并测定滴度。重组的腺病毒体外感染培养的Caco-2细胞，以含有EGFP但无UT-B的腺病毒空载体为对照，RT-PCR检测Caco-2细胞中UT-BmRNA的表达，Westernblot检测UT-B蛋白表达，以14