tip30在脑胶质瘤中的作用及临床意义

《tip30在脑胶质瘤中的作用及临床意义》由会员上传分享，免费在线阅读，更多相关内容在学术论文-天天文库。

1、南方医科大学2010级硕士学位论文TIP30在脑胶质瘤中的作用及临床意义TheroleofTIP30ingliomaanditsclinicalsignificance课题来源：自选项目学位申请人胡莹莹导师姓名罗荣城教授专业名称肿瘤学培养类型学术型培养层次硕士所在学院研究生学院2013年月日广州硕士学位论文TIP30在脑胶质瘤中的作用及临床意义。硕士研究生：胡莹莹嬲指导老师：罗荣城摘要背景：脑胶质瘤是颅内最常见的恶性神经上皮细胞肿瘤，约占颅内肿瘤的50％。综合发病年龄高峰在30．40岁之间。目前脑胶质瘤的治疗主要有手术、放疗、化疗

2、、生物靶向治疗等手段，但由于肿瘤生长速度快并呈浸润性生长，以及对放化疗介导的细胞凋亡不敏感等恶性生物学特性，总体治疗疗效不佳，复发率高，预后差，所以明确关键的致癌途径，寻找脑胶质瘤新的预后指标和治疗靶点至关重要。TIP30(Tat．interactiveprotein30)是一相对分子质量为30KD的转录共分子，基因定位于人类第11号染色体，可与人类免疫缺陷病毒(humanimmunodeficiencyvirus，HIV)转录辅助因子Tat蛋白结合，调节蛋白Tat的转录活性，从而特异性地提高HIV的增殖。近年来国内外多项研究均提

3、示TIP30其实是一种新的抑癌基因，它在人类正常组织如心、脑、肺、肾、胰腺中广泛表达，但在乳腺癌、肺癌、肝癌、胃癌、肠癌、涎腺癌等多种恶性肿瘤中低表达甚至缺失。目前研究发现TIP30主要是通过延缓细胞生长，诱导细胞凋亡，抑制肿瘤新生血管生成，调节DNA损伤修复，调节细胞对葡萄糖的耐受性，调节细胞内外大分子物质的转运，增加肿瘤细胞对化疗的敏感性等多种功能起到抑制肿瘤发展的作用。尽管TIP30在多种恶性肿瘤中的作用逐渐明朗，但目前有关TIP30与脑胶质瘤之间的相关性报道仍较少，TIP30在脑胶质瘤中是否也充当着抑癌基因的角色尚不清楚。

4、表皮生长因子受体(epidermalgrowthfactorReceptor，EGFR)是一种跨膜糖蛋白，分子量170Da，属于酪氨酸激酶型受体，通过与EGF等配体摘要结合后激活下游信号传导通路如MAP姗RK、P13K／AKT等从而介导肿瘤细胞分化、生长、迁移、侵袭、黏附和细胞损伤修复等一系列过程。研究发现EGFR基因在人脑恶性胶质瘤中常常出现扩增、重排、突变和过度表达，其下游AKT、ERK等信号通路蛋白在也存在过表达与共表达，借助于信号转导使细胞生长失控和转化，并且与胶质瘤的恶性程度呈正相关。有关TIP30与EGFR之间的关系目

5、前也是研究的热点。肖华等研究发现在TIP30基因敲除的小鼠中，EGFR下游通路上调，自发性肺肿瘤的发生率增高。进一步研究证实TIP30可与细胞膜上ACSL4、EndophilinB1等物质形成复合物，影响早期内涵体环节的EGFR分选，加速EGFR和配体EGF的分离，促进EGFR向溶酶体的分选和降解，从而终止EGFR下游信号通路的传导，达到抑制肿瘤发展的作用。但是目前在脑胶质瘤中TIP30与EGFR的相关关系尚未清楚，TIP30是否也可以通过下调EGFR及其下游信号传导通路来发挥其生物学作用，需要我们进一步研究证实。目的：本实验旨在

6、研究TIP30在脑胶质瘤组织和正常脑组织中蛋白表达情况的差异，及其与脑胶质瘤患者临床病理特征、预后之间的关系。然后进一步在细胞水平验证TIP30对脑胶质瘤细胞生长、迁移、侵袭、凋亡等功能的影响。最后探讨TIP30与EGFR两者在脑胶质瘤中的相关关系。材料与方法：1．主要的实验材料1．1组织标本收集南方医科大学附属南方医院2006至2011年脑外科收治的92名脑胶质瘤患者术后石蜡病理组织。其中男性40人，女性52人，中位年龄35岁。所有病人术前未进行放化疗，且均经病理组织学诊断为脑胶质瘤。其中星型胶质细胞瘤42例，少突胶质细胞瘤25

7、例，胶质母细胞瘤25例。病理分级WHOI．II级42例，III．IV级50例。肿瘤大d',>5cm有47例，<5cm有45例。另取10例癫痫病人手术后脑组织作为对照。本实验已经通过医院医学伦理委员会的同意批准。1．2实验试剂II硕士学位论文兔抗人的TIP30多克隆抗体，兔抗人EGFR单克隆抗体，兔抗人的pAKT和pERK单克隆抗体，辣根过氧化物酶标记山羊抗兔二抗，DAB显色剂，苏木素，无水乙醇，95％酒精，1％盐酸酒精，RIPA裂解液，SDS．PAGE凝胶配置试剂盒，Trizol、逆转录试剂盒及SYBRGreenI荧光定量试剂盒，

8、胎牛血清，high-glucoseDMEM，转染试剂lip02000，质粒提取试剂盒，MTT，Matrigel基底胶，AnnexinV．FITC细胞凋亡检测试剂盒等。1．3实验仪器恒温孵箱，流式细胞仪，电泳槽，PCR扩增仪，冰箱，光学显微镜，高速离