snap25对神经病理性疼痛兴奋抑制失衡作用机制的研究

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1、万方数据中图分类号UDCR6146lO博士学位论文学校代码!Q三3三密级公珏SNAP25对神经病理性疼痛兴奋抑制失衡作用机制的研究ThemechanismofSNAP--25relieveneuropathicpaininratsbyamelioratingtheimbalancedneurotransmission作者姓学科专研究方学院(系、指导教论文答辩日期兰!圣!!!兰’名：刘畅业：临床医学向：麻醉学所)：湘雅医院师：郭曲练教授答辩委员会主席中南大学2013年11月学位论文原创性声明一掣掣掣煳万方数据本人郑重声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及

2、取得的研究成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得中南大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。申请学位论文与资料若有不实之处，本人承担一切相关责任。作者签名：．产捧日期：渺年炸月答日学位论文版权使用授权书本学位论文作者和指导教师完全了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定：即学校有权保留并向国家有关部门或机构送交学位论文的复印件和电子版；本人允许本学位论文被查阅和借阅；学校可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，

3、可以采用复印、缩印或其它手段保存和汇编本学位论文。保密论文待解密后适应本声明。作者签名：7酋王釜一日期：世年Ⅱ月监日导师签名＼万方数据SNAP．25对神经病理性疼痛兴奋抑制失衡作用机制的研究摘要研究背景神经病理性疼痛由中枢或者外周躯体感觉神经系统的损伤或疾病而导致的疼痛。中枢神经系统中，疼痛信号的传递通过递质的释放和清除完成，这一过程连续而精确。其中递质释放主要依赖于形成SNARE复合物，而递质清除则通过一系列特异性的递质转运体完成(如兴奋性递质谷氨酸转运体GT和抑制性递质GABA转运体GAT-1)。神经病理性疼痛中存在兴奋性递质过度激活和抑制性递质缺失的现象，称之为兴

4、奋抑制失衡。SNAP．25是SNARE复合物三种蛋白之一，因此能调节递质释放。GLT则是清除中枢神经系统突触间隙中谷氨酸最重要的两种谷氨酸转运体之一。SNAP．25在神经病理性疼痛中对递质释放的作用，及其对GLT和GAT介导递质清除的影响，尚待研究。目的构建大鼠坐骨神经慢性压迫性损伤(chronicconstrictioninjury，CCI)模型，鞘内注射A型肉毒素降低SNAP．25的表达，动态观察大鼠疼痛行为学的变化与SNAP．25表达水平的关系，检测兴奋性谷氨酸转运体GLT及抑制性GABA递质转运体GAT的变化，探讨探索SNAP．25对兴奋性和抑制性递质释放和后续

5、清除的调控机制，了解其对神经病理性疼痛的治疗机制。方法1．腰段鞘内置管成功的雄性SD成年大鼠随机分为3组：假手术+生理盐水组(sham+NS组)，、CCI+生理盐水组(CCI+NSⅡ万方数据组)、CCI+BoNT／AO．01U组(CCI+BoNT／A组)。CCI组按照Bennett和Xie的方法建立大鼠左侧坐骨神经慢性压迫性损伤模型，假手术组仅暴露左侧坐骨神经不结扎，术前及术后3、5、7、lO、14天进行机械痛阈、热痛阈检测。术后14天测试后于深麻醉下处死取脊髓腰膨大段行Western．blot以及RT-PCR测定。2．所有大鼠术后14天测试后于深麻醉下处死取脊髓腰膨大

6、段行一GLT的逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction，ImPCR)检测兴奋性谷氨酸递质转运体GLT和离子型谷氨酸受体NMDA中NR2B亚基的表达变化。3．大鼠术后14天测试完毕后于深麻醉下处死，取脊髓腰膨大段采用免疫组织化学、逆转录聚合酶链反应(reversetranscriptionpolymerasechainreaction，RT-PCR)和蛋白印迹(westernblot)方法检测抑制性GABA递质转运体GAT的表达变化。结果1．术前两组大鼠机械痛阈和热痛阈无明显差别(P>O．05)，术后第3天

7、，相对于sham组，CCI组机械痛阈和热痛阈明显下降(P