中华绒螯蟹5-HT7和DA2受体基因克隆及几种生理过程中的表达分析.pdf

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1、学校代码：10264研究生学号：M150101039上海海洋大学硕士学位论文中华绒螯蟹5-HT7和DA2受体基因题目：克隆及几种生理过程中的表达分析Cloningandexpressionanalysisof5-HT7英文题目：andDA2inseveralphysiologicalprocessesofEriocheirsinensis专业：水产养殖研究方向：中华绒螯蟹生长发育与生理姓名：黄根勇指导教师：杨筱珍成永旭二O一八年五月上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独

2、立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海海洋大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□，在年

3、解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注答辩地点答辩日期上海海洋大学硕士学位论文中华绒螯蟹5-HT7和DA2的基因克隆及几种生理过程中的表达分析摘要生物胺广泛分布于甲壳动物的神经系统组织，其中5-羟色胺（serotonin，5-HT）和多巴胺（dopamine，DA）参与调节动物机体的诸多重要的生理功能，包括繁殖、摄食和攻击行为等，而对中华绒螯蟹中这两种生物胺的研究尚未见报道。本研究为了探究5-HT和DA是否参与了中华绒螯蟹繁殖、

4、光期适应和摄食的生理过程，首先对中华绒螯蟹5-HT7受体和DA2受体进行了初步探究，并对它们在多种组织中的表达进行了分析，随后筛选5-HT7和DA2表达较高的组织，对它们在上述生理过程中的表达情况进行分析，同时我们进行了不同浓度的色氨酸（5-HT前体物质）饲料对中华绒螯蟹5-HT受体、蜕壳相关受体和消化酶影响的研究，结果如下：本论文采用逆转录PCR（ReversetranscriptionPCR，RT-PCR）和cDNA末端快速扩增技术（RapidamplicationofcDNAends，RACE）获得中华绒螯蟹5-HT7（GenBankacc

5、essionnumber:GM601745）和DA2（GenBankaccessionnumber:MF683118）受体基因的全长序列。其中，5-HT7受体基因全长包含2328个核苷酸，其中开放阅读框（openreadingframe,ORF）含有1773个核苷酸（包含终止密码子），编码590个氨基酸；DA2序列全长2369bp，开放阅读框中含1770bp，编码589个氨基酸。两者都属于G-蛋白偶联受体超家族，具有七个跨膜区，包含高度保守的DRY残基和其他多个保守区。通过实时荧光定量PCR（Quantitativereal-timePCR,qP

6、CR）技术研究这两个基因在中华绒螯蟹不同组织和不同卵巢发育阶段、不同光周期和不同摄食阶段下的表达情况。结果显示上述两个基因在眼柄、肝胰腺、胸神经节、肠道、脑神经节、腮、肌肉、血淋巴和心脏等9个组织中均有表达，并且在脑、胸神经节中表达水平最高，而且在肠道中5-HT7受体的表达水平与脑、胸神经节无显著性差异I上海海洋大学硕士学位论文（P>0.05），与其他组织表达水平有显著性差异（P<0.05）。随着中华绒螯蟹的生长和卵巢的发育，Ⅲ期和Ⅳ期卵巢中5-HT7受体的表达水平显著高于Ⅰ期（P<0.05），而DA2的表达水平在Ⅰ-Ⅴ期呈现下降趋势，Ⅳ期卵巢D

7、A2的表达水平显著低于Ⅰ期和Ⅱ期（P<0.05）。在胸神经节中，持续光照下5-HT7受体表达水平显著提高；在脑神经节中，持续黑暗显著增加了DA2的表达量。在摄食后，肝胰腺和肠道中5-HT7和DA2受体表达量均显著上升。这些数据表明，5-HT7受体对中华绒螯蟹的卵巢成熟具有一定的促进作用，而DA2受体对卵巢成熟有抑制作用；5-HT7受体和DA2受体参与中华绒螯蟹的光期适应和摄食消化过程。本论文通过投喂不同浓度（0.36%（A组），0.47%（B组），0.73%（C组）和1.05%（D组））色氨酸饲料，探讨色氨酸对中华绒螯蟹脑神经节、胸神经节、肠道和

8、肝胰腺四种组织中5-HT受体基因（5-HT1B、5-HT2B、5-HT7）、蜕壳相关基因（Chi、EcR、MIH）表达水平和肝胰腺消化酶