中华绒螯蟹促性腺激素释放激素受体(GnRHR)同系物的克隆及其表达特征

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1、学校代码：10264研究生学号:M150111239上海海洋大学硕士学位论文中华绒螯蟹促性腺激素释放激素受体（GnRHR）同系物题目：的克隆及其表达特征Molecularcloningandexpressivecharacterizationof英文题目：gonadotropin-releasinghormonereceptorhomologintheChinesemittencrab,Eriocheirsinensis专业：海洋科学研究方向：虾蟹分子遗传与繁殖姓名：张树芳指导教师：邱高峰教授，马克

2、异讲师二O一八年五月上海海洋大学硕士学位论文答辩委员会成员名单姓名工作单位职称备注王春琳宁波大学教授主席杨万喜浙江大学教授委员周文玉上海市水产研究所研究员委员马克异上海海洋大学讲师秘书答辩地点生命学院B102答辩日期2018年5月26日上海海洋大学学位论文原创性声明本人郑重声明：我恪守学术道德，崇尚严谨学风。所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究工作所取得的成果。除文中已经明确注明和引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的作品及成果的内容。论文为本人亲自撰写，我对

3、所写的内容负责，并完全意识到本声明的法律结果由本人承担。学位论文作者签名：日期：年月日上海海洋大学学位论文版权使用授权书学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定,同意学校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅或借阅。本人授权上海水产大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。保密□,在年解密后适用本版权书。本学位论文属于不保密□学位论文作者签名：指导教师签名：日期：年月日日期：年月日中华绒

4、螯蟹促性腺激素释放激素受体（GnRHR）同系物的克隆及其表达特征摘要作为促性腺激素释放激素（gonadotropin-releasinghormone，GnRH）信号通路的重要的成分，GnRH受体(GnRHR)和GnRH结合，然后在刺激一系列的激素级联反应调控性腺的发育中起到重要的作用。目前，本实验室已从中华绒螯蟹脑和卵巢转录组库中筛选出GnRH信号通路的相关基因，筛选出的这些基因的序列与大多数昆虫类以及其他甲壳类动物的基因序列有较高的相似性。并且，我们实验室已经成功分离出中华绒螯蟹GnRH类似物。

5、目前，关于中华绒螯蟹GnRHR基因的研究仍为空白。同时为了研究在无脊椎动物中GnRHR的分子机制以及潜在GnRH信号通路，本实验选取了我国重要的水产类品种中华绒螯蟹（Eriocheirsinensis）作为对象，研究在无脊椎甲壳动物中促性腺激素释放激素受体的分子鉴定和表达。在为了检测GnRHR分布特征，本实验中，首先在中华绒螯蟹Eriocheirsinensis(命名为EsGnRHR)中克隆得到了GnRHRcDNA序列并对其表达特征进行了分析。EsGnRHR全长为2038bp，包括一个1566bp的

6、开放阅读框，57bp的5′端非编码区和415bp的3′端非编码区。结构域预测显示EsGnRHR蛋白质包括7个跨膜α螺旋结构域，该特征符合在脊椎动物中已经鉴定得出的促性腺激素释放激素受体。聚类进化树分析说明中华绒螯蟹促性腺激素释放激素受体和无脊椎动物日本沼虾（Macrobrachiumnipponense）的亲缘关系比较近。其次RT-PCR检测了EsGnRHR基因在中华绒螯蟹成体中上海海洋大学硕士学位论文各个组织中的表达情况，结果发现，EsGnRHR表达主要分布在胸神经团、卵巢中，有少量分布在精巢和脑

7、中。然后原位杂交验证EsGnRHRmRNA的分布，EsGnRHRmRNA杂交信号主要分布在脑组织的前部和中部。在卵巢组织中，信号主要分布在卵黄发生前期的细胞质和卵黄发生期细胞中的分散细胞质中；同时在精巢组织中，EsGnRHRmRNA主要分布在精巢的精母细胞和精母细胞中，这些结果显示GnRHR基因确实存在于中华绒螯蟹体内。最后实时荧光定量PCR分析不同的性腺发育的阶段的表达情况，EsGnRHRmRNA的表达量在精巢和卵巢发育时期中的数据说明EsGnRHR参与调控性腺的发育。最后，荧光定量分析注射中华绒

8、螯蟹GnRH类似物多肽对EsGnRHRmRNA表达的影响，结果显示，EsGnRHR表达水平在雄性中华绒螯蟹在15d（day）出现显著性差异，雌性中华绒螯蟹中在24h（hour）和7d时间点均有显著性差异，这些数据说明GnRH多肽类似物能够刺激EsGnRHR的表达。总之，本实验结果第一次证明了GnRHR存在于中华绒螯蟹中。对EsGnRHR基因分子特性进行了系统分析，并对其与其他物种的进化关系进行了研究。EsGnRHRmRNA分布在胸神经和性腺。进一步的研究证明，EsGn