rack1基因表达上调对小鼠肝癌淋巴道转移细胞株生物学行为的影响及相关机制的研究

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1、中图分类号密级Rackl基因表达上调对小鼠肝癌淋巴道转移细胞株生物学行为的影响及相关机制的研究7’1‘influenceand,chanismofupregulatedRacklthelheUenceanmecnanlsmOtuorelateOKacK10ntllebiologicalbehaviorsoflymphaticmetastasisofmouse计：学位论文：83页表插格：19个图：22幅hepatocarinomacelllines指导教师：唐建武教授武俊学科(专业)：病理学与病理生理学培养单

2、位：大连医科大学完成时间：二。一三年四月答辩委员会主席：独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的研究成果。据我所知，除了文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得大连医科大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。学位论文作者签名：毯兰叁签字日期：丝年±月』日关于学位论文使用授权的说明本学位论文作者完全了解学校有关保留、使用学位论文的规定，同意学

3、校保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅。本人授权大连医科大学可以将本学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存和汇编本学位论文。本学位论文属于(请在以下相应方框内打“J’’)：作者签名导师签名1．保密口，在一年解密后适用本授权书。2．不保密4日期：力1>年弘月IO日)日期≯乃年p月／孑日10目录一、摘要⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OOO⋯1(一)中文摘要⋯⋯⋯⋯OOO⋯OOQOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯1(二)英文摘

4、要⋯⋯⋯⋯DOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯5二、正文⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯9第一部分：Raekl基因表达稳定上调小鼠肝癌淋巴道转移．Hea．P细胞株的构建及鉴定(一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯99(一)日!J吾⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯(二)材料和方法⋯⋯⋯0OQOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯OO0⋯⋯⋯101．材料⋯⋯⋯⋯OOQODO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯OO0101．1动物和细胞系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯101．2主要仪器及试剂⋯⋯⋯⋯⋯

5、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯102．方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．1载体构建与验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯112．2Hca．P细胞培养及转染⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯142．3荧光实时定量PCR检测Rackl基因的表达⋯⋯162．4Westernblot检测Rackl蛋白的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯172．5统计学处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯18(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．载体构建验证⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．1重组质粒的测序结果⋯

6、⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯181．2Rack1基因序列⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯182．荧光显微镜下绿色荧光蛋白的表达⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯193．稳定转染细胞中Rackl基因在mRNA水平的表达⋯204．稳定转染细胞中Rackl基因在蛋白水平的表达⋯⋯21(四)讨论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯22(五)参考文献⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯24(六)结论⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯27第二部分：Rackl基因表达上调对小鼠肝癌淋巴道转移细胞株体外增殖、迁移和侵袭能力的影响(

7、一)前言⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28(一)刚舌⋯”⋯⋯⋯““⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯28(二)材料与方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯291．材料⋯⋯⋯⋯OOO⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯291．1动物和细胞系⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯291．2主要材料⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292．方法⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯292．1CCK8法检测稳定转染后Hca．P细胞增殖能力⋯⋯292．2Transwell小室检测稳定转染后Hca．P

8、细胞迁移能力⋯302．3Transwell小室检测稳定转染后Hca．P细胞侵袭能力⋯302．4统计学处理⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯30(三)结果⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯⋯311．Rackl基因表达上调对Hca．P细胞增殖能力的影响⋯⋯⋯312．Rackl基因表达上调对Hca．P细胞迁移能力的影响⋯⋯⋯313．Rackl基因表达上调对Hca．P细胞侵袭能力的影响⋯⋯⋯32(四)讨论⋯⋯⋯⋯