ptx对gper介导的雌激素激活的子宫内膜癌细胞中pi3kakt信号通路的影响

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1、AthesissubmittedtoZhengzhouUniversityForthedegreeofMasterTheinfluenceofpertussistoxinonGPER-mediatedactivationofphosphatidylinositol3-kinase／proteinkinaseBsignalinginducedby1713一estradiolinendometrialcarcinomacellsBy：JiaLeiSupervisor：Prof．Rui—XiaGuoObstetricsandGynecol

2、ogyDepartmentofObstetricsandGynecology,thefirstAffiliatedHospital，ZhengzhouUniversityMay2013原创性声明本人郑重声明：所呈交的学位论文，是本人在导师的指导下，独立进行研究所取得的成果。除文中已经注明引用的内容外，本论文不包含任何其他个人或集体已经发表或撰写过的科研成果。对本文的研究作出重要贡献的个人和集体，均已在文中以明确方式标明。本声明的法律责任由本人承担。学位论文作者：日期：年月日学位论文使用授权声明本人在导师指导下完成的论文及相关的职务作

3、品，知识产权归属郑卅I大学。根据郑州大学有关保留、使用学位论文的规定，同意学校保留或向国家有关部门或机构送交论文的复印件和电子版，允许论文被查阅和借阅：本人授权郑州大学可以将本学位论文的全部或部分编入有关数据库进行检索，可以采用影印、缩印或者其他复制手段保存论文和汇编本学位论文。本人离校后发表、使用学位论文或与该学位论文直接相关的学术论文或成果时，第一署名单位仍然为郑州大学。保密论文在解密后应遵守此规定。学位论文作者：日期：年月同摘要PTX对GPER介导的雌激素激活的子宫内膜癌细胞中PI3叭KT信号通路的影响研究生雷佳导师郭瑞霞郑州

4、大学第一附属医院妇产科河南郑州450052背景与目的子宫内膜癌是女性生殖系统常见的恶性肿瘤之一，发病率逐年上升。但子宫内膜癌的临床治愈率改善不明显，尤其是晚期和复发患者的中位生存时间仍不足1年。子宫内膜在缺乏孕激素对抗的高雌激素水平的长期刺激下，可以发生异常增生并向恶性转化，从而导致子宫内膜癌的发生，但目前雌激素导致子宫内膜癌的发病机制尚不完全明了。传统观点认为，雌激素与其受体结合后在细胞核内通过“转录效应”发挥作用。然而，该作用模式并未能使子宫内膜癌和乳腺癌等激素依赖性肿瘤得到有效的控制：除了经典的“转录效应”，雌激素还可以通过“

5、非转录效应”发挥作用。研究表明，雌激素还可以激活子宫内膜癌细胞磷脂酰肌醇3激酶(P13K)／蛋白激酶B(Akt)信号通路，发挥“非转录效应”促进癌细胞生长。那么，什么介导了雌激素的“非转录效应”?最可能的候选分子是G蛋白偶联雌激素受体(GPER)。本课题组的前期研究表明，GPER在雌激素受体(ER)高表达的子宫内膜癌细胞系Ishikawa细胞(ERQ、ERB均阳性表达)和ER低表达的子宫内膜癌细胞系HEC一1A细胞(ERQ阳性表达，ERB阴性表达)中均有不同程度的表达，本研究通过应用GPER阻断剂一百日咳毒素(PTX)阻断GPER的

6、作用后，观察其对Ishikawa和HEC-1A细胞中雌激素激活的Akt活化状态的影响，以及细胞中GPER和ERQ、ER6蛋白表达的变化，以了解PTX对GPER介导的雌激素活化的子宫内膜癌细胞中P13K／AKT信号通路的摘要影响。材料与方法1材料子宫内膜癌细胞系Ishikawa及HEC-1A均由北京大学人民医院妇产科重点实验室魏丽惠教授惠赠。2方法采用静置贴壁体外培养法培养人子宫内膜癌HEC—IA及Ishikawa细胞；当HEC一1A及Ishikawa细胞进入对数生长期后，采用免疫组化SP法分别检测两种细·‘胞系中GPER蛋白的表达；

7、将不同浓度(0、0．1、0．5、1．0ug／m1)的PTX分别处理HEC一1A及Ishikawa细胞30min后；再予上述浓度的PTX分别联合17B雌二醇(170-E2；1×i0吨mol／L)共同处理HEC一1A细胞15min、Ishikawa细胞30min，采用蛋白印记法检测HEC—lA及Ishikawa细胞中GPER，ERQ、ERB蛋白的表达及AKT的活化状态[AKT的活化状态以磷酸化AKT(p—Akt)／Akt表示]。3统计学分析对实验结果采用SPSS17．0统计软件进行统计学处理。结果以j±S表示，经过正态性和方差齐性检验后

8、行方差分析，各组间的两两比较用Bonferroni法，／2<0．05为显著性检验标准，实验结果均重复3次。复士里。日木1．免疫组化法检测显示，在Ishikawa和HEC-1A细胞中GPER蛋白均在细胞质中呈棕黄色阳性表达。2．蛋白印迹