mycn在神经母细胞瘤中表达及其作用的研究

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2、ffectionofMYCNInNeuroblastomaAuthor:XingLiliAdvisor:WuYeMingSpecialty:PediatricsDirection:PediatricsTumorApplicationfordegreecategories：MasterStudentIDNo.1107229340TrainingUnit:XinHuaHospitalAffiliatedToShanghaiJiaoTongUniversitySubmittingDate:April,2012上海

3、交通大学万方数据上海交通大学硕士学位论文万方数据上海交通大学硕士学位论文万方数据上海交通大学硕士学位论文MYCN在神经母细胞瘤中表达及其作用的研究摘要神经母细胞瘤(neuroblastoma，NB)是儿童最常见的恶性实体肿瘤之一，占儿童肿瘤死亡人数的15％，其恶性程度高，可早期转移至骨髓、骨组织，预后较差，故深入研究NB的发生、发展机理至关重要。MYCN是MYC家族成员，可编码核蛋白转录因子，在肿瘤的发生发展转移中有重要作用。约25％～30％的神经母细胞瘤患儿MYCN基因呈高表达，与低生存率，肿瘤复发，预后

4、差及对化疗药物敏感性降低等相关。因而深入了解MYCN在神经母细胞瘤发生发展中的作用及机制对神经母细胞瘤治疗产生积极的影响。本课题共分两个部分：（1）熊果酸对神经母细胞瘤细胞增殖凋亡及MYCN表达的影响；（2）MYCN与OPN在神经母细胞瘤中表达的相关性研究。【关键词】神经母细胞瘤；MYCN；熊果酸；OPN。第一部分熊果酸对神经母细胞瘤细胞增殖凋亡及MYCN表达的影响目的神经母细胞瘤是位居第二的儿童恶性实体肿瘤，已发现MYCN基因的高表达与预后密切相关。研究显示熊果酸作为中成药对多种肿瘤有治疗作用，但对儿童神

5、经母细胞瘤是否有影响尚未报道。本实验拟应用熊果酸作用于体外培养的神经母细胞瘤细胞株(SH-SY-5Y)，观察熊果酸对肿瘤细胞增殖、凋亡及MYCN基因mRNA表达的影响。方法以终浓度为4uM/L、8uM/L、12uM/L的熊果酸作用于神经母细胞瘤细胞SH-SY-5Y，WST-1法检测SH-SY-5Y细胞增殖情况，流式细胞术检测SH-SY-5Y细胞凋亡情况，采用RealtimePCR方法检测MYCNmRNA的表达情况。结果熊果酸对SHSY-5Y细胞增殖的抑制呈明显的剂量、时间依赖性，随剂量的增加，作用时间的延长

6、，抑制效果逐渐加强；熊果酸对SH-SY-5Y细胞凋亡的促进呈明显的剂量依赖性，随剂量的增加，促进凋亡效果逐渐加强；熊果酸对SHSY-5Y细胞MYCN表达有抑制作用并有明显的剂量依赖性，随剂量的增1万方数据上海交通大学硕士学位论文加，抑制效果逐渐加强。12uM/L作用72h后神经母细胞瘤细胞增殖抑制效率达98.3%，MYCN基因mRNA表达抑制率达52.37％。结论应用熊果酸在体外环境作用SH-SY-5Y细胞，可以有效抑制该细胞的增殖、促进细胞凋亡、抑制原癌基因MYCNmRNA的表达。【关键词】神经母细胞瘤；

7、熊果酸；细胞增殖；细胞凋亡；MYCN。第二部分MYCN与OPN在神经母细胞瘤中表达的相关性研究目的神经母细胞瘤是儿童常见的恶性实体肿瘤，研究发现MYCN在神经母细胞瘤中呈高表达。也有报道OPN在多种肿瘤中具有促进肿瘤的发生发展的作用，在儿童神经母细胞瘤中也呈高表达，但MYCN与OPN是否有相关性尚不清楚。本实验拟应用siRNA抑制神经母细胞瘤细胞(SK-N-BE(2))MYCN的表达，观察NB细胞OPNmRNA及蛋白的表达变化情况，以了解MYCN与OPN在神经母细胞瘤的发生发展中是否有相关性。方法在四株MY

8、CN表达程度不同的神经母细胞瘤细胞株（SK-N-BE(2)、IMR-32、SH-SY-5Y、SK-N-SH)间比较MYCN及OPNmRNA及蛋白表达情况；应用siRNA抑制MYCN表达量最高的神经母细胞瘤细胞MYCN的表达后，采用RealtimePCR及westernblot法检测MYCN及OPNmRNA及蛋白表达。结果四株神经母细胞瘤细胞株中MYCN表达高者OPN表达亦高，其中SK-N-BE(2)细胞株的MYC